O diagnostico molecular evoluiu de forma dramática nas ultimas décadas e um avanço da biotecnologia para o diagnóstico das doenças infecciosas foi o desenvolvimento da PCR (Reação em cadeia da Polimerase) em tempo real (RTutilizadas sondas de ácido nucléico (sondas genéticasque são fragmentos de DNA ou RNA com estrutura complementar a uma seqüência do ácido nucléico a ser detectado.

Dentre as inúmeras aplicações deste método está a detecção e quantificação do DNA e RNA em amostraspara o diagnostico e monitoramento da infecção pelo vírus HIV, o vírus da Hepatite B(HBV) e Hepatite C (HCV)sorológicos trata-se de alternativa “padrãodiagnóstico precoce e confiável de infecçõesmuitas vezes silenciosas.

O método de PCR permite detectar o vírus na forma do seu RNA (HIV e Hepatite C) ou DNA (Hepatite B)sensibilidade e especificidade como teste confirmatório fluxograma de triagens sorológicas, especialmente na fase aguda da infecção pelo vírus HIV. De forma complementar, quantificada a “carga viral”, corresponde à dinâmica de produção e liberação de partículas virais na circulação dos indivíduos infectados. As principais indicações médicas para um agente infeccioso são:

Avaliar a progressão da doença Indicar o início da terapia Determinar a eficácia da terapêutica

Considerando a alta prevalência de pacientes infectados, os testes de biologia molecular representam não apenas a confirmação dos testes de triagem, mas o avanço no tratamento e orientação da terapêutica através da genotipagem. O HCV foi um dos primeiros vírus descobertos por técnicas de biologia molecular e a detecção do RNA viral é aceita como “padrão ouro”. Em pacientes submetidos hemodiálise ou transplante não é raro a coexistênciacrônica com anti-HCV negativo, sendo necessário utilizar o teste PCR qualitativo.

Muitas infecções, tanto pelo vírus B quanto o vírus C são infecções “silenciosas” e podem evoluir para a cirrose e o câncer. Nos casos crônicos sem alteração de enzimas pode se tratar de infecção curada ou ainda em atividadedetectadas cópias virais por PCR.

t i I n f o r m a t i v o D i g i t a l - N º 0 1

BIOLOGIA MOLECULAR E

A técnica de PCR em tempo rea

com sensibili

O diagnostico molecular evoluiu de forma dramática nas avanço da biotecnologia para o diagnóstico

das doenças infecciosas foi o desenvolvimento da PCR (Reação ia da Polimerase) em tempo real (RT- PCR). São

cido nucléico (sondas genéticas ou primers), que são fragmentos de DNA ou RNA com estrutura complementar

ácido nucléico a ser detectado. Dentre as inúmeras aplicações deste método está a

detecção e quantificação do DNA e RNA em amostras biológicas amento da infecção pelo vírus HIV, o

(HCV). Aliada aos exames de alternativa “padrão-ouro” para um

diagnóstico precoce e confiável de infecções freqüentes, graves e

ite detectar o vírus na forma do Hepatite B). Portanto, possui

sensibilidade e especificidade como teste confirmatório no specialmente na fase aguda

forma complementar, pode ser dinâmica de produção e ação dos indivíduos

As principais indicações médicas da PCR quantitativa

Avaliar a progressão da doença

Determinar a eficácia da terapêutica

nsiderando a alta prevalência de pacientes infectados, os testes de biologia molecular representam não apenas a confirmação dos testes de triagem, mas o avanço no tratamento e orientação da terapêutica através da genotipagem.

HCV foi um dos primeiros vírus descobertos por técnicas de biologia molecular e a detecção do RNA viral é

Em pacientes submetidos à hemodiálise ou transplante não é raro a coexistência de hepatite

sendo necessário utilizar o teste

Muitas infecções, tanto pelo vírus B quanto o vírus C são infecções “silenciosas” e podem evoluir para a cirrose e o

Nos casos crônicos sem alteração de enzimas pode se u ainda em atividade se for

Em se tratando do HIV, dados divulgados peloda Saúde mostram que 734 mil pessoas portadoras, mas 20% não sabem que têdiagnostico precoce e a adoção do tratamento com retroviraisnão apenas aos que possuem uma carga viral alta,importante no combate à mortalidade. No cenário mundial a infecção responsável por 80% dos carcinomas primários o que o torna a décima cauda de morte e o5º câncer mais freqüente. acompanhamento da infecção pelo vírus da hepatite B é a perda sustentada do antígeno de superfície (sem soro conversão para antiinfectividade e replicação viral em pacientes portadores crônicos deve-se usar o método de PCR detecção de Anti-HBc isolado, pode ocorrer em vírus mutantes causando uma baixa produçãausência do HbeAg e são uma indicação para avaliação pelo método de PCR qualitativo. Dentre as indicações de utilização da carga quantitativo) no monitoramento dosde HBeAg reagente com ausência de cirrose; hepatcrônica em crianças; coinfecção outros

Existem disponíveis para plataformas para a realização do exame com boareprodutibilidade. Entretanto, recomendasejam comparados dentro do mesmo método, pois os princípios podem ser diferentes.

Atualmente estes testes estão sendo realizados no setor de biologia molecular do Lab Rede utilizando um sistema totalmente automatizado de extração de ácidos nucléicos com a metodologia PCR em tempo real, que elimina muitos erros operacionais e risco de contaminação entre amostras. Referências bibliográficas: 1-Manual de Carga Viral HIV: http://www.aids.gov.br/sites/default/files/Manual_de_Carga_Viral_HIV_2-Protocolo Clínicas e Diretrizes TerapêuticasViral Crônica B e Coinfecções: http://www.sbhepatologia.org.br/pdf/politicas_publicas/hepatiteB.pdf3-HCV testing and linkage to care http://www.hcvguidelines.org/printpdf/124-Recent advances in molecular diagnostics of hepatitis BVirus: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4209528/pdf/WJG14615.pdf

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BIOLOGIA MOLECULAR E DOENÇAS INFECCIOSAS

A técnica de PCR em tempo real é um poderoso aliado ao diagnó

com sensibilidade, precisão, velocidade e capacidade de quantificação

dados divulgados pelo Ministério mostram que 734 mil pessoas no Brasil são

portadoras, mas 20% não sabem que têm o vírus. O diagnostico precoce e a adoção do tratamento com retrovirais, não apenas aos que possuem uma carga viral alta, é muito importante no combate à mortalidade.

a infecção crônica pelo vírus HBV é carcinomas hepatocelulares (CHC)

primários o que o torna a décima cauda de morte e o CHC o mais freqüente. O resultado ideal no

acompanhamento da infecção pelo vírus da hepatite B é a perda sustentada do antígeno de superfície (HbsAg), com ou

para anti-HBs. Para avaliar a infectividade e replicação viral em pacientes portadores

se usar o método de PCR qualitativa. A HBc isolado, pode ocorrer em vírus

mutantes causando uma baixa produção de HbsAg ou uma indicação para avaliação pelo

utilização da carga viral (HBV DNA itoramento dos pacientes estão os casos com ausência de cirrose; hepatite viral

crônica em crianças; coinfecção outros vírus (HDV,HCV).

xistem disponíveis para diagnóstico diferentes plataformas para a realização do exame com boa reprodutibilidade. Entretanto, recomenda-se que os resultados

jam comparados dentro do mesmo método, pois os

Atualmente estes testes estão sendo realizados no setor de biologia molecular do Lab Rede utilizando um sistema totalmente automatizado de extração de ácidos

com a metodologia PCR em tempo real, que elimina muitos erros operacionais e risco de contaminação entre

http://www.aids.gov.br/sites/default/files/Manual_de_Carga_Viral_HIV_-_1.pdf Clínicas e Diretrizes Terapêuticas para o Tratamento da Hepatite

http://www.sbhepatologia.org.br/pdf/politicas_publicas/hepatiteB.pdf http://www.hcvguidelines.org/printpdf/124-

Recent advances in molecular diagnostics of hepatitis B http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4209528/pdf/WJG-20-

DOENÇAS INFECCIOSAS

l é um poderoso aliado ao diagnóstico

de quantificação.