7/25/2019 ED Enzimas

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Bioqumica EQ3a Lista de Exerccios

1) Qual a condio para que a velocidade de uma reao enzimtica seja consideradamxima?

2) Por que preferimos determinar a constante de Michaelis pelo mtodo de Lineweaver-Burk?Qual a principal limitao deste mtodo?

3) Considerando uma reao enzimtica envolvendo um nico substrato, faa esboos degrficos que representem resultados experimentais simulados, que seriam obtidos nosensaios necessrios para o estudo desta enzima hipottica.No se esquea de especificar os parmetros dos eixos.

a- Curva de progresso de reao , indicando a fase de velocidade inicial para [E] fixa.b- Curva mostrando a dependncia da velocidade em relao concentrao de

substrato em duas concentaes de enzima.(indicar qual a maior concentro de E)c- Plot de Lineweaver-Burk eom duas concentraes de enzima. (indicar qual a maiorconcentrao de E)d- Curva 1/v vs 1/[S] na presena de duas concentraes de um inibidor competitivo,indicando a maior concentrao de I. No esquecer o controle sem inibidor.

4) Um extrato bruto livre de clulas contm 20mg de protena/ml. 10ml deste extrato, numvolume total padro de reao de 0,5ml, catalisaram a formao de 30 nmoles de produto emum minuto, sob condies timas de ensaio (pH, T, m, etc)

a) Expresse a velocidade em nmoles/ml.minb) Qual seria o valor da velocidade se os mesmos 10ml fossem ensaiados num volumetotal de 1ml?c) Qual a concentrao de enzima na mistura de reao e no extrato, em termos deunidades/ml?d) Qual a atividade especfica da preparao?

5) O stio ativo de uma enzima contm um nico grupo ionizvel que deve estar na formanegativa para que o substrato possa ligar-se e a catlise possa ocorrer. O pK deste grupo 5,0. O substrato um composto carregado positivamente e fica ionizado em toda a faixa depH estudada.

a- Escreva as reaes mostrando o efeito do pH na distribuio das espciesenzimticas.b- Deduza uma equao de velocidade para este sistema.c- Qual seria o aspecto do grfico velocidade vs pH?

6) Que fenmenos esto envolvidos quando se estuda a ao da temperatura sobre umareao enzimtica?

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7) verdade que em temperaturas mais baixas que a T tima no existe desnaturao?Justifique.

8) Por que a equao de Michaelis-Menten s tem validade quando se usa valores develocidade inicial? O que voc entende por velocidade inicial?

9) Na tabela abaixo esto resumidos os resultados obtidas na purificao de uma enzima deSaccharomyces cerevisiae. Complete os dados que faltam na tabela. Se, aps acromatografia em peneira molecular, fosse detectada uma atividade total de 8000 unidades,como voc explicaria este fato?

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OQI FQT UUT

10) O grfico abaixo mostra o plot de Lineweaver-Burk para a determinao da velocidade deuma reao enzimtica em funo da concentrao do substrato, na ausncia e na presenade 1 mM de um inibidor. Determine o tipo de inibio. Justifique a sua resposta.

11) A influncia da concentrao de substrato sobre a velocidade inicial de uma reaoenzimtica forneceu, pelo mtodo de Lineweaver-Burk, a equao y=3x+2. Na presena deum inibidor I obteve-se, pelo mesmo mtodo, a equao y=5x+2, para [I] = 10mM.(a) A partir destes dados diga, justificando sua resposta, que tipo de inibidor reversvel asubstncia I.(b) Calcule Ki para o complexo EI.

(c) Determine a equao que ser obtida se I for usado na concentrao 30mM.

-0,80

-0,40

0,00

0,40

0,80

1,20

1,60

2,00

2,40

-0,2 -0,1 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4

1/[S]

1/V