Bacteriologia 2º/2017 17/08/2017

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CULTIVO DE MICRORGANISMOS IN VITRO

Para cultivar microrganismos em sistemas artificiais, deve-se obedecer a requisitos básicos,como a utilização de um meio com aporte nutritivo adequado para aquele microrganismo,além de condições físico-químicas adequadas para seu desenvolvimento.

O meio de cultura deve atender as exigências nutricionais específicas do grupo, do gênero ou da

espécie que se deseja cultivar.

Algumas bactérias crescem em qualquer meio de cultura, outras necessitam de meios especiais e

também existem bactérias que não são capazes de crescer em nenhum meio de cultura já

desenvolvido.

Meio de Cultura: mistura de compostos nutrientes necessários ao

crescimento microbiano.

O que deve conter um meio de cultura?

a) Quantidade de água necessária

b) Substâncias nutritivas em quantidades adequadas

� Fonte de energia

� Fonte de carbono, nitrogênio, enxofre e fósforo

� Fonte de sais e íons

� Fatores de crescimento

c) Condições físico-químicas adequadas

� Temperatura adequada (termófilos, mesófilos e psicrófilos)

� pH adequado (2 a 9)

� Pressão osmótica adequada

� Atmosfera de incubação (aeróbios, anaeróbios, microaerófilos)

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Estado Físico

Quanto ao estado físico, os meios de cultura podem ser:

� Líquidos

� Sólidos (1,5% de agar p/v)

� Semi-sólidos (0,5 a 0,75% de agar p/v)

Agar: polissacarídeo obtido a partir de algas, que funciona como agente solidificante. Não tem

função nutritiva no meio de cultura (PF = 95°C)

Classificação dos meios de cultura

�Meios sintéticos ou quimicamente definidos

�Meios complexos

�Meios redutores

�Meio basal ou simples

�Meios ricos

Composição

Quanto a composição, os meios de cultura podem ser:

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� Meios sintéticos ou quimicamente definidos:

Todos os constituintes são conhecidos.

� Meios complexos:

Contém ingredientes desconhecidos na composição química. Utilizados paracultura de microrganismos com requerimentos nutricionais complexos oudesconhecidos. Podem conter peptonas (hidrolisados de proteínas preparadaspor digestão proteolítica parcial de carne, caseína, soja ou gelatina), extrato decarne e/ou extrato de levedura.

� Meios redutores:

Adicionados de agentes redutores (tioglicolato de sódio, cisteína) que secombinam com o oxigênio eliminando-o do meio de cultivo.

Composição

Quanto a composição, os meios de cultura podem ser:

� Meio basal ou simples:

Permite o crescimento de espécies pouco exigentes como asEnterobacteriaceae.

Ex: caldo nutritivo (peptona, NaCl, extrato de carne); água peptonada.

� Meios ricos:

Meio basal enriquecido com ovo, soro ou sangue, substâncias que permitem ocrescimento de bactérias muito exigentes em termos nutricionais e que seencontram em número reduzido.

Meios caracterizados por ausência de inibidores. Podem ou não ser diferenciais.Exemplos: Agar sangue, Brain and Heart Infusion (BHI)

Composição

Quanto a composição, os meios de cultura podem ser:

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Função

Quanto a função, os meios de cultura podem ser:

�Meios de enriquecimento

�Meios seletivos

�Meios diferenciais

�Meios seletivos diferenciais

�Meios de transporte e preservação

Meios de enriquecimento

São meios líquidos, que favorecem o crescimento de determinadas espéciesaumentando a sua quantidade relativamente a outras, facilitando o isolamento de ummicrorganismo de interesse. Ex.: caldo de selenito de sódio => permite enriquecimentode Salmonella e Shigella nas fezes.

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Permitem apenas o crescimento das bactérias de interesse, pois possuemsubstâncias inibidoras de outros grupos bacterianos. Exemplos:

• Meio McConkey (peptona, lactose, NaCl, sais biliares e vermelho de metila)

Meio diferencial para fermentação de lactose e seletivo para bacilos gram negativos (bactérias de origem intestinal,enterobactérias). Bactérias que fermentam lactose produzem ácidos formando colônias rosas (LAC +), e colônias nãofermentadoras de lactose permanecem incolores (LAC -). Contém sais biliares e corantes que inibem o crecimento debactérias gram +

• Meio EMB• Agar Manitol Salgado

Agar McConkey Agar ManitolAgar EMB

Meio seletivos/ seletivos diferenciais

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Meios que servem para o transporte e conservação de um material biológico a partir do

qual se propõe isolar um ou mais microrganismos. O papel principal deste meio é

manter os microrganismos vivos. Ex: meio de Stuart para bactérias anaeróbias e

bactérias frágeis tipo Neisseria gonorrhoeae.

Meios de transporte

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Cultivo de bactérias aeróbias

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Cultivo de bactérias microaerófilas

Cultivo de anaeróbios(Métodos de produção de ambiente

anaeróbio)

Método físico

90% Nitrogênio, 10% CO2

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Método químico

Jarra Gas Pak®

O gerador Gas Pak® ativado pelo acréscimo de água é

colocado dentro da jarra hermeticamente fechada.

Gera, por reação química, CO2 e H2 que é captado por

catalisadores para formação de H2O e livrar o sistema de

O2

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85% Nitrogênio,

10% Hidrogênio,

5% CO2

Método químico e físico

Câmara Anaeróbica

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