Disserta§£o Mestrado_Adriana Micheli[1]

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ii

Adriana Micheli

Variabilidade intraespecfica, inimigos naturais e avaliao da mistura de

fungos entomopatognicos e inseticidas para o controle de Diabrotica speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera: Chrysomelidae).

Dissertao apresentada Coordenao do Curso

de Ps-Graduao em Cincias Biolgicas, rea

de Concentrao em Entomologia, da

Universidade Federal do Paran como requisito

parcial para obteno do ttulo de Mestre em

Cincias Biolgicas.

Orientador: Dr. Daniel R. Sosa-Gmez

Curitiba, PR

2005

Variabilidade intraespecfica, inimigos naturais e avaliao da mistura de fungos entomopatognicos e inseticidas para o controle de Diabrotica

speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera: Chrysomelidae).

Por

Adriana Micheli

Tese aprovada como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em

Cincias Biolgicas, no Curso de Ps-Graduao em Cincias Biolgicas, rea de

Concentrao em Entomologia da Universidade Federal do Paran, pela banca

examinadora:

__________________________________

Dr. Daniel R. Sosa-Gmez

(Orientador - Embrapa Soja)

___________________________________

Dr. talo Delalibera Jr.

(Esalq - USP)

___________________________________

Dra. Snia M. N. Lazzari

(UPPR)

A Deus

Ofereo

minha me Sueli

Dedico

Agradecimentos

Ao Dr. Daniel R. Sosa-Gmez, pela orientao, amizade e apoio irrestritos.

Coordenao do Curso de Ps-Graduao em Entomologia da UFPR e aos

professores, pela oportunidade de freqentar o curso.

Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES), pela

bolsa de estudo concedida.

Ao Centro Nacional de Pesquisa de Soja, da Empresa Brasileira de Pesquisa

Agropecuria (Embrapa Soja), pelo fornecimento da estrutura necessria

realizao deste trabalho.

Aos funcionrios do Laboratrio de Patologia de Insetos Ivanilda Soldorio, Fbio

Paro e Jos Jairo da Silva, pela inestimvel colaborao na conduo dos

trabalhos de laboratrio, por serem profissionais to competentes nos momentos

necessrios e amigos de todas as horas.

Ao funcionrio do Laboratrio de Bioecologia de Percevejos, Jovenil Jos da Silva,

pelo constante auxlio na realizao deste trabalho.

Ao funcionrio do Laboratrio de Criao de Lagartas, Adair Carneiro, pelo valioso

trabalho fotogrfico.

Aos funcionrios de campo Elias, Eupdio, Oriverto, Pavo, Valter e Wilson, pela

valiosa colaborao na coleta dos insetos.

Aos funcionrios do Laboratrio de Biotecnologia Vegetal, Csar, Silvana e Vera,

pelo apoio tcnico (e psicolgico) nos trabalhos moleculares.

v

Aos funcionrios do Laboratrio de Tecnologia e Patologia de Sementes, pela

convivncia sempre to agradvel.

Dra. Beatriz Corra-Ferreira, Rose e Joacir, pela colaborao na realizao dos

experimentos em casa de vegetao.

Aos amigos Edson Hirose, Ednia Borges, Frederico Henning e Marliton Barreto,

pelos ensinamentos, pelo companheirismo e amizade.

Aos amigos e colegas do Curso de Mestrado do ano 2003, em especial Adelita,

Ana Paula, Anamaria, Culi, Fernanda, Elis, Gil Felipe, Mari e Vencio. O tempo de

convivncia foi curto, mas o carinho enorme. Aos colegas do doutorado Leandro

e Geane.

Ao Dr. Rui Scaramella Furiatti (UEPG), Dr. Lus Alves (UNOESTE), Francisco

Lozano Leonel Jnior (Bayer CropScience) pelo envio de insetos.

Ao Dr. Ronaldo Toma, pela identificao das moscas parasitides.

Ao MSc. Luciano Moura, da Fundao Zoobotnica do Rio Grande do Sul, pelo

auxlio na identificao das espcies de Cerotoma e pelo apoio constante nos

estudos com Diabrotica.

Professora Valria Langendick, pela reviso da gramtica e ortografia.

Ao Dr. Flvio Moscardi, pelo eterno bom humor.

Dra. Ivana Barbola, por ter sido a primeira a me ensinar Entomologia.

Ao Rangel, por estar sempre ao meu lado para absolutamente tudo!

vi

minhas amigas... Milena Raimam, Silvia Beatriz e Vilmarise Bobato. O

verdadeiro amigo aquele que nos faz melhor do que somos.

Em especial a minha me e meu pai, pelo exemplo distinto de honestidade e

perseverana, que contriburam de forma relevante no meu desenvolvimento

pessoal. Aos meus irmos Juliano e Luciana, por plantarem em meu corao a

amizade sincera. Obrigada pelo apoio, incentivo e patrocnio!

A todos que, de alguma forma, contriburam na realizao deste trabalho.

O homem que venceu na vida aquele que viveu bem, riu muitas vezes e amou

muito; que conquistou o respeito dos homens inteligentes e o amor das crianas,

que preencheu um lugar e cumpriu uma misso; que deixa o mundo melhor do

que encontrou, seja com uma flor, um poema perfeito ou o salvamento de uma

alma; que procurou o melhor nos outros e deu o melhor de si.

R. L. Stevenson

Sumrio

Agradecimentos.................................................................................. v

Resumo............................................................................................... xii

Abstract............................................................................................... xiv

Lista de Tabelas.................................................................................. xv

Lista de Figuras.................................................................................. xviii

Captulo 1. Introduo e Reviso Bibliogrfica

1.1. Introduo........................................................................................... 1

1.2. Reviso Bibliogrfica.......................................................................... 2

1.2.1. Importncia econmica de Diabrotica speciosa................................. 2

1.2.2. Uso de marcadores moleculares RAPD em estudos de

variabilidade gentica.........................................................................

4

1.2.3. Estudos moleculares realizados com espcies do gnero

Diabrotica............................................................................................ 6

1.2.4. Ocorrncia de inimigos naturais em D. speciosa................................ 8

1.2.5. Utilizao de fungos entomopatognicos em programas de controle

de insetos............................................................................................

9

1.3. Literatura citada.................................................................................. 14

Captulo 2. RAPD para estudo de populaes de Diabrotica speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera: Chrysomelidae)

2.1. Introduo........................................................................................... 26

2.2. Material e Mtodos............................................................................. 27

2.2.1. Extrao de DNA................................................................................ 28

ix

2.2.2. Quantificao de DNA........................................................................ 29

2.2.3. Anlise molecular do DNA atravs da tcnica de RAPD.................... 29

2.2.4. Anlise de dados................................................................................ 30

2.3. Resultados e Discusso..................................................................... 31

2.4. Concluses......................................................................................... 35

2.5. Literatura citada.................................................................................. 36

Captulo 3. Ocorrncia de Protozorios, Parasitides e Fungos em Diabrotica speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera: Chrysomelidae)

3.1. Introduo........................................................................................... 41

3.2. Material e Mtodos............................................................................. 44

3.2.1. Avaliao de inimigos naturais em populaes de campo de D.

speciosa.............................................................................................. 44

3.2.2. Densidade do inculo de fungos entomopatognicos relacionada

rea foliar............................................................................................ 44

3.3. Resultados e Discusso..................................................................... 45

3.4. Concluses......................................................................................... 52

3.5. Literatura citada.................................................................................. 53

Captulo 4. Eficincia de isolados de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em mistura com inseticidas no controle de Diabrotica speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera: Chrysomelidae)

4.1. Introduo........................................................................................... 60

x

4.2. Material e Mtodos............................................................................. 61

4.2.1. Seleo de isolados de Beauveria bassiana e Metarhizium

anisopliae em Diabrotica speciosa..................................................... 61

4.2.2. Determinao da DL50 dos isolados de Beauveria bassiana em

Diabrotica speciosa.

64

4.2.3. Determinao da DL5 dos inseticidas em D. speciosa.......................