PCR SSP

PCR-SSPAcadêmicos:

Bruna Campos, Hortência Gomes, Rebeca Furtado, Yuri Guedes

Professora orientadora:

Cláudia Penaforte

Centro Universitário de Belo Horizonte – UNIBHFaculdade de MedicinaDisciplina: Biologia Molecular

O que é?

• O PCR-SSP é uma abordagem de genotipagem de DNA com base na utilização de sequências específicas (SSP);

• Consiste de múltiplos iniciadores de PCR específicos para diferentes polimorfismos genéticos. Exemplo: HLA;

• Várias PCRs são preparadas para cada amostra e os produtos de amplificação específicos serão produzidos se os iniciadores são complementares ao DNA da amostra.

Disponível em: <https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html>

Material Utilizado

• DNA

• Tampão

• dNTP

• MgCl2• Primer "específico"

• Taq polimerase

• Termociclador

• Gel de agarose (para correr a eletroforese)

Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>

Aplicação

• Análise de polimorfismos únicos de nucleotídeos (SNPs);

• Principalmente para determinar antígenos HLA (que são altamente polimórficos);

• Teste de compatibilidade entre doadores e receptores em transplantes;

• Farmacogenética;

• Diagnóstico de doenças.


HLA

• Sistema do HLA Antígenos HLA;

• Importância no estudo da rejeição de órgãos;

• Defesa imunológica;

• Existem várias proteínas do sistema imune que estão associadas ao HLA: MHC-I, MHC-II, Citocinas, Interleucinas, Interferons.


Processo PCR-SSP

• Colocar o DNA em diferentes tubos contendo dois primers PCR;

• Um dos primers hibridiza uma região conservada do locus HLA, sendo adicionado a todos os tubos;

• O segundo primer hibridiza com uma região polimórfica do locus HLA;*cada tubo contem um primer de especificidade diferente.

• A amplificação do DNA só será observada no tubo contendo o segundo primerespecífico que corresponde ao alelo (alta resolução) ou ao grupo de alelos (baixa resolução) do HLA na amostra do DNA;

• Eletroforese em gel de agarose.

Disponível em: <http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/220>

Disponível em: <http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691>




Vantagens

• Diagnóstico precoce de doenças;

• Em um único teste, mais de um polimorfismo pode ser identificado;

• Mais eficiente que o teste de sorologia;

• Fácil e rápida execução.

Disponível em: <www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf>

Desvantagens

• Baixa resolução (grupos de alelos);

• Contaminação;

• Uso do gel de agarose limita o tamanho do fragmento;

• Requer habilidade técnica;

• Alto custo do equipamento.

Disponível em: <http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499>

Referências

• https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html, acesso em junho, 2015.

• http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/220, acesso em junho, 2015.

• http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf, acesso em junho, 2015.

• http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499, acesso em junho, 2015.

• http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf, acesso em junho, 2015.

• http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691, acesso em junho, 2015.

Agradecemos a atenção!

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