Campus de Botucatu

Instituto de Biocincias PG-BGA

DETECO E ESTUDO SOBRE O EFEITO DA

METANFETAMINA E DO ECSTASY NO

DESENVOLVIMENTO DE IMATUROS DE TRS ESPCIES

DE CHRYSOMYA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE) DE

IMPORTNCIA FORENSE

CAROLINA GONALVES PALANCH DE LIMA

Dissertao apresentada ao Instituto de Biocincias, Campus de Botucatu, UNESP, para obteno do ttulo de Mestre no Programa de Ps-Graduao em Biologia Geral e Aplicada e rea de concentrao em Biologia de parasitas e microorganismos.

Dra. Patrcia Jacqueline Thyssen (orientadora)

BOTUCATU SP.

2009

1

Campus de Botucatu

Instituto de Biocincias

PG-BGA UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

Jlio de Mesquita Filho INSTITUTO DE BIOCINCIAS DE BOTUCATU

DETECO E ESTUDO SOBRE O EFEITO DA

METANFETAMINA E DO ECSTASY NO

DESENVOLVIMENTO DE IMATUROS DE TRS ESPCIES

DE CHRYSOMYA (DIPTERA: CALLIPHORIDAE) DE

IMPORTNCIA FORENSE

CAROLINA GONALVES PALANCH DE LIMA

Dissertao apresentada ao Instituto de Biocincias, Campus de Botucatu, UNESP, para obteno do ttulo de Mestre no Programa de Ps-Graduao em Biologia Geral e Aplicada e rea de concentrao em Biologia de parasitas e microorganismos.

Dra. Patrcia Jacqueline Thyssen (orientadora)

BOTUCATU SP.

2009

i

FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA SEO TCNICA DE AQUISIO E TRATAMENTO DA INFORMAO DIVISO TCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAO - CAMPUS DE BOTUCATU - UNESP

Bibliotecria responsvel: Selma Maria de Jesus

Lima, Carolina Gonalves Palanch de. Deteco e estudo sobre o efeito da metanfetamina e do ecstasy no desenvolvimento de imaturos de trs espcies de Chrysomya (Dptera: Calliphoridae) de importncia forense / Carolina Gonalves Palanch de Lima. Botucatu: [s.n.], 2009. Dissertao (mestrado) Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biocincias, Botucatu, 2009.

Orientadora: Patrcia Jacqueline Thyssen Assunto CAPES: 21303002 1. Entomologia forense - Ecologia 2. Inseto - Aspectos biolgicos CDD 595.74 Palavras chave: Biologia de necrfagos; Calliphoridae; Ecstasy; Entomologia Forense; Metanfetamina

ii

A busca mais importante

para o ser humano a tentativa de

ter moral em nossas aes. Nosso

equilbrio interior e, at, nossa

prpria existncia depende disso.

Somente a moralidade em nossas

aes pode trazer beleza e

dignidade para nossa vida.

Albert Einstein (1879-1955)

iii

Who saw him die? I, said the fly

With my little eye, I saw him die.

iv

AGRADECIMENTOS

Aos meus pais, Marcio e Ins, por serem responsveis pela minha formao tica

e moral e por sempre apoiarem as decises que tomei durante toda a minha vida.

Ao meu marido, Wagner, com amor, pelo incentivo nos momentos em que o

cansao apareceu e pela pacincia nos momentos em que me ausentei.

minha orientadora Dra. Patrcia J. Thyssen que muito alm da orientao, me

ofereceu sua amizade o que tornou esse trabalho muito mais fcil e prazeroso de ser

realizado.

Aos professores Dr. Wesley A. C. Godoy e Dr. Arcio Xavier Linhares por

permitirem que meu trabalho fosse realizado em seus laboratrios na UNESP Botucatu

e UNICAMP, respectivamente.

Aos colegas de laboratrio da UNESP por estarem sempre dispostos a me ajudar,

em especial Juliana Alves Neves que alm de me ajudar na realizao dos experimentos

me acolheu de braos abertos em sua casa nos perodos em que fiquei em Botucatu;

Juliana Zibordi Gio pela solicitude e por providenciar o padro de anfetamina necessrio

para a realizao de parte dos meus experimentos e aos colegas Thiago de Carvalho

Moretti, Carlos Chitos Alexandre Alves e Helton Borbs Otsuka por suas

contribuies no campo da taxonomia de insetos.

Ao meu colega de profisso e mestrado, o perito criminal Edmilson Martins, por

conseguir, legalmente, ecstasy para realizao de parte dos meus experimentos, alm de

me proporcionar diversas dicas sobre atendimentos de locais de crime e lies de vida.

Aos meus colegas de laboratrio da UNICAMP por, alm de ajudar na realizao

dos experimentos, me proporcionarem momentos de diverso no meio de tanto trabalho:

Marcos Leguinho Jos Alves Jr. por me ensinar a tcnica de imunohistoqumica e me

divertir com suas imitaes; Maicon Radical Diego Grella por passar sua experincia

com a criao das larvas e pelos docinhos deliciosos que trazia de Rio Claro; Carina

Rice Mara de Souza por me ajudar com os experimentos fizesse sol ou chuva, fosse

final de semana ou precisasse trabalhar at a madrugada; Bianca Fadinha Cardoso e

Fabio Frango Rezende por serem solcitos todas as vezes que, desesperadamente,

precisei de ajuda.

v

Aos professores Dr. Alessandro Francisco Talamini do Amarante, Dra. Luciene

Maura Mascarini Serra e Dra. Carolina Reigada por suas contribuies construtivas no

exame de qualificao.

s minhas colegas de profisso, perita criminal Elosa Auler Bittencourt por me

apresentar minha orientadora e por disponibilizar um espao no laboratrio de biologia

do Instituto de Criminalstica de So Paulo caso fosse necessrio; s peritas criminais

Maria de Ftima Pedroso e Camila Delanesi Guedes por quantificarem o MDMA

existente nos comprimidos de ecstasy usados no experimento.

Ao meu chefe e aos meus colegas peritos criminais da Equipe de Percias

Criminalsticas Norte da Cidade de So Paulo do Instituto de Criminalstica pelas

inmeras trocas de planto para que eu pudesse fazer as disciplinas e realizar meus

experimentos.

minha grande amiga Francine Vilalta Chilliato e sua famlia por me

hospedarem com muito carinho em suas casas nos perodos que passei em Campinas.

vi

SUMRIO

Resumo .................................................................................................... 01

Abstract .................................................................................................... 02

1 - Introduo e Reviso Bibliogrfica ...................................................... 03

1.1 - Entomotoxicologia ................................................................................... 08

1.2 - Aplicaes da Entomotoxicologia ........................................................... 09

1.2.1 - Deteco de substncias txicas em larvas de insetos necrfagos 10

1.2.2 - Acumulao biolgica (bioacmulo) ........................................... 14

1.2.3 - Atratividade na colonizao ......................................................... 16

1.2.4 - Efeito das drogas sobre o desenvolvimento larval ....................... 16

1.3 - Derivados anfetamnicos ......................................................................... 28

1.3.1 Toxicocintica ............................................................................. 30

1.3.2 Toxicodinmica ........................................................................... 30

1.3.3 - Dependncia e tolerncia ............................................................. 31

1.3.4 Metanfetamina ............................................................................. 31

1.3.5 Ecstasy ......................................................................................... 33

1.4 - Espcies de interesse forense deste estudo .............................................. 38

2 - Objetivos Gerais .................................................................................... 40

3 - Deteco e estudo do efeito da metanfetamina no desenvolvimento de imaturos de duas espcies de Chrysomya (Diptera: Calliphoridae) de interesse forense ......................................................

41 3.1 - Introduo ................................................................................................ 41

3.2 - Material e Mtodos .................................................................................. 43

3.3 - Resultados e Discusso ............................................................................ 45

4 - Estudo do efeito do ecstasy no desenvolvimento de imaturos de trs espcies de Chrysomya (Diptera: Calliphoridae) de interesse forense ..................................................................................................... 51

4.1 - Introduo ................................................................................................ 51

4.2 - Material e Mtodos .................................................................................. 52

4.3 - Resultados e Discusso ............................................................................ 53

5 - Concluses Gerais .................................................................................. 63

6 - Referncias Bibliogrficas .................................................................... 64

1

RESUMO

A Entomologia Forense utiliza dados de desenvolvimento e aspectos ecolgicos

de insetos que se alimentam de corpos em decomposio com o objetivo de auxiliar a

resoluo de casos na rea forense. Uma das principais aplicaes, entre outras, a

estimativa do intervalo ps-morte (IPM) que pode ser baseada no ciclo biolgico de uma

dada espcie. Porm, a falta de informao ou conhecimento sobre as variveis que

interferem de forma direta ou indireta sobre a taxa de desenvolvimento de diferentes

espcies pode gerar dados imprecisos em relao idade do inseto e, consequentemente,

ao IPM. Recentemente, devido ao aumento no nmero de bitos relacionados ao abuso

de drogas, anlises toxicolgicas tm sido direcionadas a insetos necrfagos, visando

complementar informaes acerca da causa da morte, assim como garantir maior

acurcia ao clculo do IPM, uma vez que certas substncias ingeridas antes do bito

podem alterar a taxa de desenvolvimento de algumas espcies que se alimentam dos

tecidos de cadveres. Esse ramo mais recente da entomologia forense conhecido como

Entomotoxicologia. No presente estudo objetivou-se observar o efeito de diferentes

concentraes de metanfetamina e ecstasy, derivados anfetamnicos que tiveram seu

consumo aumentado nas ltimas dcadas no Brasil, na taxa de desenvolvimento de

imaturos dos califordeos Chrysomya albiceps (Wiedemann), Chrysomya megacephala

(Fabricius) e Chrysomya putoria (Wiedemann), quando acrescidos em dieta artificial

apropriada. A anfetamina, metablito da metanfetamina, no afetou de forma

significativa o desenvolvimento larval de C. megacephala, no entanto, aumentou o tempo

de desenvolvimento de imaturos de C. putoria, em especial a fase de pupa. O MDMA,

principal componente do ecstasy, no alterou a taxa de desenvolvimento larval de C.

albiceps e C. putoria, mas acelerou consideravelmente a de C. megacephala. Atravs do

mtodo de imunohistoqumica tentou-se fazer a deteco de anfetamina em larvas de C.

megacephala e C. putoria, porm os resultados mostraram-se inconclusivos.

Palavras-chave: metanfetamina; ecstasy; Calliphoridae; biologia de necrfagos; IPM;

Entomologia Forense; Entomotoxicologia.

2

ABSTRACT

Forensic Entomology uses data about development and ecology of insects that

feed on corpses aiming to assist to solve forensic cases. One of its main aplication,

among others, is to estimate the pos-mortem interval (PMI) that can be based on the life

cycle of a specific species. However, the lack of information or knowledge about the

variables that can change directly or indirectly the development rate of different species

can lead to inaccurate data about the age of the insect and, consequently, the PMI.

Recently, due to the increasing number of death related to drug abuse, toxicological

analyses have been directed to necrophagous insects intending to provide complementary

information about the cause of death, as well as to asure a more acurate estimate of PMI,

once some substances ingested before death can modify the development rate of some

species that feed on cadaver tissues. This new branch of Forensic Entomology is known

as Entomotoxicology. The aim of the present study was to observe the effect of different

concentrations of methamphetamine and ecstasy, two amphetamine-like drugs which

abuse rose among Brazilians in the last decades, on the development rate of immature of

Calliphoridae Chrysomya albiceps (Wiedemann), Chrysomya megacephala (Fabricius)

and Chrysomya putoria (Wiedemann), when added to artificial diet proper for them to

complete their development. Amphetamine, methamphetamines metabolite, did not

affect significantly the larval development of C. megacephala, although it increased the

time of development of C. putoria maggots, specially the pupa stage. MDMA, the main

compound of ecstasy, did not alter the larval development rate of C. albiceps nor C.

putoria but it accelerated, considerably, the development rate of C. megacephala.

Through immunohistochemical analyses it was tried to detect amphetamine in larvae of

C. megacephala and C. putoria, but the results were inconclusive.

Key words: methamphetamine; ecstasy; Calliphoridae; necrophagous biology; PMI;

Forensic Entomology; Entomotoxicology.

3

1 INTRODUO E REVISO BIBLIOGRFICA

Os artrpodes constituem um grande grupo de animais dos quais o nmero de

espcies descritas trs vezes maior do que a quantidade de espcies de todas as outras

espcies animais (Barnes & Rupert, 1993). Dentro do filo Artrpoda, o subfilo Hexapoda

compreende a classe Insecta e outros trs grupos de animais sem asas, Collembola,

Protura e Diplura, todos essencialmente terrestres, mas com a existncia de grupos que

invadiram secundariamente ambientes aquticos (Brusca & Brusca, 2007).

O sucesso dos insetos marcado pelo grande nmero de espcies e indivduos e por

possurem a mais espetacular irradiao evolutiva dos Hexapoda, ou seja, habitam quase

todos os habitats no meio terrestre e na gua doce e, ainda, a superfcie dos oceanos e

regies litorneas marinhas (Barnes & Rupert, 1993; Brusca & Brusca, 2007).

Alm disso, corpos de animais em decomposio atraem uma grande variedade de

organismos, dos quais os artrpodes constituem fauna dominante, utilizando este micro

habitat temporrio para se alimentar, viver e procriar (Von Zuben, 2001).

A rea de estudo que aplica o conhecimento sobre o desenvolvimento e aspectos

ecolgicos de insetos e outros artrpodes no auxlio de investigaes, tanto criminais

como cveis, denominada Entomologia Forense (Catts & Goff, 1992; Hall, 2001).

Um dos primeiros casos documentados sobre entomologia forense est relatado no

livro The washing away of wrongs, de autoria de Sung Tsu, um advogado e investigador

chins do sculo 13, onde descrito um caso de assassinato prximo a uma lavoura de

arroz na China. Ao perceber que os ferimentos da vtima poderiam ter sido causados pela

ferramenta de trabalho utilizada por agricultores na lavoura, policiais solicitaram que

fossem colocadas suas foices no cho e notou-se assim que, em somente uma delas, havia

presena de moscas varejeiras que teriam sido atradas pela presena no visvel de

sangue. Quando confrontado, o dono da foice admitiu o crime (Benecke, 2001).

Em 1855, o mdico francs Bergeret reportou o primeiro caso de entomologia

forense na era moderna estimando o intervalo ps-morte (IPM) com base nas mudas de

larvas e pupas de moscas varejeiras encontradas no local (Benecke, 2001; Greenberg,

1991). Mas o grande mrito na fundao desta cincia coube a Mgnin (1894) em sua

obra denominada La faune des cadavres: application de lentomologie a la medecine

4

legale descreve oito estgios de decomposio e a cada estgio associou uma onda de

insetos que o colonizam e os quais ele deu o nome de trabalhadores da morte

(Travailleurs de la mort).

A primeira onda formada pelas moscas (Diptera), dando como exemplo os

gneros Musca e Calliphora que chegam fase de decomposio denominada fresca (do

francs frais) e permanecem at a fase seguinte. Com o incio da liberao do odor (fase

gasosa) surge a segunda onda que tambm ocupada por moscas, pertencentes aos

gneros Lucilia e Sarcophaga. A terceira onda, cuja decomposio cadavrica

caracterizada pela formao de cidos graxos (adipocera) e que ocorre cerca de trs a seis

meses (em pases temperados) aps a morte tem-se a chegada de espcies das famlias

Coleoptera e Lepidoptera (Mgnin, 1894).

Na fase de fermentao d-se incio a quarta onda onde as moscas predominantes

so dos gneros Piophila e Anthomyia. Na fase de decomposio denominada liquefao,

inicia a quinta onda formada por dpteros acaliptrados e colepteros da famlia Silphidae.

A sexta onda composta por caros que iro absorver os lquidos remanescentes das

demais fases. Quando os restos esto quase que todos secos (esqueletizados), tem-se a

stima onda que composta por insetos da ordem Coleptera. A oitava e ltima onda

composta por duas espcies, uma do gnero Tenebrio e uma do gnero Plinus que

finalizaro a decomposio (Mgnin, 1894).

No caso do Brasil, essa sucesso pode ser um pouco diferente pelo fato de ser um

pas de regio tropical e clima mais quente o que acelera o processo de decomposio.

Wolff et al. (2001) realizaram um trabalho de sucesso ecolgica em Medelim, na

Colmbia, no qual identificaram cinco estgios de decomposio e fizeram consideraes

sobre as famlias que podem ser indicadores de perodos de decomposio sucessivos.

Para a fase de decomposio fresca os indicadores seriam adultos de Muscidae e

Sarcophagidae; para a fase de inchao ovos e larvas de Calliphoridae e adultos de

Vespidae; para a fase denominada de ativa seriam larvas de Sarcophagidae; para o

estgio avanado seriam as larvas de Piophilidae e para a fase seca seriam as larvas de

Histeridae e Scarabaeidae (Wolff et al., 2001).

Segundo Lord e Stevenson (1986) a Entomologia Forense est subdividida em

trs principais reas:

5

- Entomologia urbana: estudos relacionados a problemas, tais como

litgios e aes civis, envolvendo artrpodes em imveis ou como pestes

em casas ou jardins. Como exemplo podemos citar infestaes de cupins

(trmitas), baratas entre outros que podem depreciar o valor de mercado

de imveis ou causar danos que comprometam a segurana. Tambm

esto inclusos nesta rea processos legais relacionados com o mau uso de

pesticidas;

- Entomologia de produtos armazenados/estocados: est relacionado com

infestao ou contaminao de produtos comerciais em grande escala

como, por exemplo, presena de insetos, ou parte deles, em barras de

doce, moscas em ketchup ou aranhas em papel de banheiro. Geralmente

esses casos tambm envolvem litgios;

- Entomologia mdico-legal/mdico-criminal: est relacionado com o

envolvimento de artrpodes em eventos criminais, geralmente de cunho

violento como assassinato, suicdio e estupro, porm tambm esto

inclusas nesta rea outras violaes como abuso fsico e

trfico/contrabando.

Dentre as razes para utilizao de insetos nas investigaes criminais podemos

citar o fato dos insetos serem geralmente os primeiros a encontrar o corpo em

decomposio; alm do fato da fauna de artrpodes no corpo e ao redor dele mudar numa

seqncia sucessional previsvel conforme progride a decomposio, fato denominado

sucesso ecolgica; e porque atualmente, a fauna do cadver ignorada como vestgio do

crime quando os investigadores processam o local da morte (Catts & Goff, 1992).

Na rea da Entomologia Mdico-legal, uma anlise cuidadosa da comunidade de

insetos encontrada num corpo em decomposio, associada ao conhecimento da biologia

e ecologia do inseto e s condies ambientais do local, pode fornecer indicaes

forenses valiosas que incluem a estimativa do IPM, movimentao do cadver aps a

morte, associao de suspeitos com a cena do crime, indicao de ferimentos prvios

morte e a presena de drogas ou toxinas no corpo em decomposio, o que at poderia a

ajudar na determinao da causa da morte (Catts & Goff, 1992; Goff & Lord, 2001).

6

Nuorteva (1974) mostra como os insetos puderam ser teis na resoluo de dois

assassinatos em Helsinki, Finlndia. No quarto da casa onde havia ocorrido um dos

crimes, havia quantidade considervel de sangue seco e diversas moscas, dentre elas

Muscina stabulans (Diptera: Muscidae), espcie tambm encontrada em uma camiseta

manchada de sangue contida dentro de um saco plstico em um lixo prximo ao local. As

larvas coletadas da camiseta foram criadas em laboratrio e foi notado que as de M.

stabulans apresentaram duas ondas de emergncia. Quando da coleta, assumiu-se que a

oviposio tivesse ocorrido no dia em que a camiseta havia sido encontrada

correspondendo, com base no tempo de desenvolvimento desta espcie, a segunda onda

de emergncia. Ao calcular a data da possvel oviposio da primeira onda de emergncia

foi percebido que a data coincidia com o dia em que ocorreu o esfaqueamento, ligando a

camiseta encontrada ao local do crime.

Existem ainda reportados estudos onde foi possvel determinar negligncia aos

cuidados de pessoas incapacitadas, como crianas ou idosos, resultando em morte das

vtimas. O auxlio entomolgico, nesses casos, possibilitou imputar dolo aos responsveis

pelo cuidado de tais pessoas (Benecke & Lessig, 2001; Benecke et al., 2003).

De qualquer forma, a estimativa do IPM uma das aplicaes mais amplamente

acessadas dentro da entomologia mdico-legal utilizando-se, principalmente, do

conhecimento da biologia de moscas varejeiras (Diptera: Calliphoridae), por serem estas

as primeiras a colonizarem os cadveres (Amendt et al., 2004).

Para a estimativa de um IPM mais preciso necessrio levar em considerao:

a. A identificao correta dos exemplares de insetos, pois a estimativa baseada

no tempo de desenvolvimento da espcie e uma identificao errnea pode

acarretar erros graves neste clculo (Catts & Goff, 1992);

b. A sucesso de insetos que colonizam cadveres, uma vez que cada estgio da

decomposio atrai diferentes espcies de insetos e varivel em relao

localizao geogrfica ou sazonalidade (Carvalho et al., 2004);

c. A disperso larval ps-alimentar na qual deve se considerar pupas localizadas a

distncias variveis do cadver para no deixar de considerar as larvas mais

velhas que o abandonaram (Von Zuben, 2001);

7

d. A anlise toxicolgica (rea de estudo denominada entomotoxicologia) que

pode, em alguns casos, alterar a taxa de desenvolvimento larval e, novamente,

levar a estimativas errneas (Bourel et al., 1999).

Os insetos mais freqentemente envolvidos na estimativa de IPM so os dpteros

sendo este, tambm, o txon mais utilizado para anlises toxicolgicas. As espcies

predominantes pertencem s famlias Calliphoridae (varejeiras), Sarcophagidae (moscas

da carne) e Muscidae (moscas domsticas). As moscas pertencentes a estas famlias so

altamente mveis, resistentes ao vo e tipicamente os primeiros insetos a chegarem num

corpo em decomposio. Calliphoridae e Sarcophagidae podem chegar minutos aps a

morte, principalmente em climas tropicais e estudos de comunidades de carcaas tem

demonstrado que muscides geralmente atrasam a colonizao at o perodo final do

estgio de decomposio fresco ou at o incio do estgio inchado (Goff & Lord, 1994).

Quando uma fonte apropriada localizada, as moscas adultas comeam a ovipor

ou a se alimentar da fonte protica para mais tarde ovipor. Em cadveres sem feridas, os

stios preferenciais de oviposio sero, geralmente, os orifcios naturais do corpo (olhos,

orelhas, nariz, boca e quando expostos nus e genitlias). Os ferimentos ou sangue

podero fornecer stios preferenciais de oviposio, embora essa atrao seja varivel

conforme espcies de moscas envolvidas e grau de ferimento (Goff & Lord, 1994).

Os ovos das moscas varejeiras so pequenos (2-3 mm), alongados e de cor

branco-amarelada. So tipicamente depositados em grandes aglomerados, podendo

preencher os orifcios naturais ou locais de ferimentos. O estgio de ovos para as moscas

varejeiras dura entre um a trs dias quando eclodem larvas alongadas que possui na

extremidade anterior um par de ganchos orais que so usados para alimentao e

locomoo. A parte posterior possui um par de espirculos pelo qual as larvas respiram.

Elas crescem rapidamente passando por trs estdios ou instares antes de alcanar o

tamanho mximo (Goff & Lord, 1994; Greenberg & Kunich, 2002).

O primeiro estdio dura cerca de um dia quando ocorre a muda para o segundo

estdio que, por sua vez, pode durar um ou dois dias quando muda para o terceiro estdio

que dura por cinco ou seis dias quando param de se alimentar e entram e fase de pr-pupa

(Erzinlioglu, 2003).

8

Os ovos colocados num corpo eclodiro sincronizadamente resultando em uma

massa de larvas que se movimentam sobre o corpo e se alimentam como um grupo. Esse

comportamento resulta na disseminao de bactrias e produo de enzimas digestivas

que possibilitam s larvas consumir maior parte do tecido mole de maneira altamente

eficiente. O tamanho mximo das larvas atingido num perodo que varia de dias at

semanas, dependendo da espcie envolvida, nmero de larvas presente e condies

ambientais. Aps atingirem o tamanho mximo, as larvas sofrem uma mudana

dramtica no comportamento, param a alimentao e comeam a migrar para fora da

fonte alimentar. Essa migrao , geralmente, para uma rea seca onde as larvas se

enterram no substrato e comeam a pupariar (Goff & Lord, 1994; Erzinlioglu, 2003).

A pupariao em moscas um processo complexo e seqencial que transforma a

cutcula branca e mole da larva num puprio escuro e rgido. Nesse puprio, a larva sofre

uma reorganizao celular onde ocorre o encurtamento e expanso dela, retrao

irreversvel dos trs segmentos anteriores e contrao e estabilizao da cutcula. O

perodo requerido para essa transformao varia conforme a espcie da mosca e as

condies ambientais, principalmente temperatura. O puprio pode permanecer intacto

por anos ao redor do corpo em decomposio podendo fornecer informaes valiosas at

muito tempo depois de o corpo ter sido totalmente decomposto (Greenberg, 1991; Goff &

Lord, 1994).

O ciclo de vida dos sarcofagdeos similar ao das moscas varejeiras exceto pelo

fato de que eles no ovipositam, mas depositam larvas de primeiro estdio no substrato

escolhido como fonte. Esse processo exige que a larva em desenvolvimento seja mantida

por mais tempo no corpo da fmea do que um ovo. No entanto, o nmero de

descendentes produzidos por fmea menor para essa famlia do que para califordeos e

muscdeos (Goff & Lord, 1994).

1.1 Entomotoxicologia

A Entomotoxicologia um campo relativamente recente dentro da Entomologia

Forense e que consiste na deteco e anlise da interferncia de substncias txicas sobre

a biologia de insetos que se alimentam de carcaas para auxiliar na identificao de

9

drogas e toxinas presentes em tecidos de corpos que tenham vindo a bito por overdose

(Goff & Lord, 1994; Introna et al., 2001). Isto especialmente til quando no possvel

coletar amostras de tecidos, sangue ou urina de cadveres por estarem esqueletizados ou

em estado avanado de putrefao, servindo os insetos como alternativa segura para tais

anlises (Pien et al., 2004).

As larvas so relativamente fceis de serem coletadas e mantidas em laboratrio e

tambm podem apresentar menos contaminantes que alguns tecidos comumente usados

para anlise toxicolgica (Carvalho et al., 2001; Gangliano-Candela & Aventaggiato,

2001).

No entanto, a utilizao de insetos para anlise toxicolgica quantitativa pode no

ser uma ferramenta confivel, pois existe uma srie de fatores que influenciam na

concentrao da substncia tais como, a redistribuio ps-morte das drogas no corpo

humano, a estabilidade das drogas nos restos humanos, especialmente de onde as larvas

so retiradas e a farmacocintica de cada substncia a ser considerada nos imaturos

(Campobasso et al., 2004; Tracqui et al., 2004). Por outro lado, a no deteco de uma

substncia em larvas que se alimentam da carcaa no implica, necessariamente, na

ausncia da mesma na fonte alimentar (Campobasso et al., 2004).

Muitos estudos recentes tm detectado toxinas e substncias controladas tanto no

inseto como nos restos quitinizados recolhidos de vtimas em estgio avanado de

decomposio (Goff & Lord, 2001). Nesses casos, os insetos tm sido homogeneizados e

processados de maneira similar realizada nos tecidos ou fluidos mais tradicionalmente

analisados por diversos mtodos, tais como imuno-radio ensaio (RIA), cromatografia

gasosa (GC), cromatografia gasosa associada espectrometria de massa (GC/MS),

cromatografia de camada delgada (TLC), cromatografia lquida de alta perfomance

associada espectrometria de massa (HPLC/MS) e imunohistoqumica (IHQ) (Bourel et

al., 2001; Goff & Lord, 2001; Introna et al, 2001).

1.2 - Aplicaes da Entomotoxicologia

10

1.2.1 - Deteco de Substncias Txicas em Larvas de insetos necrfagos

O uso abusivo de frmacos prescritos para tratamento mdico de constante

interesse no mbito forense, pois pode determinar a tipificao da morte a esclarecer, ou

seja, diferenciar se um caso de homicdio ou suicdio.

Beyer et al. em 1980 sugeriram o emprego de insetos como fonte alternativa para

deteco de drogas quando tiveram um caso no qual o corpo de uma mulher, de 22 anos,

foi encontrado 14 dias aps seu desaparecimento e o seu estado de decomposio era de

quase completa esqueletizao no havendo tecido humano suficiente para o exame

toxicolgico. No local havia um frasco vazio com capacidade para 100 comprimidos

conforme indicado no rtulo que informava se tratar de fenobarbital (uma substncia da

classe dos barbitricos utilizada terapeuticamente como anticonvulsivante) e cuja

fabricao datava de dois dias antes da data do desaparecimento. Alm disso, essa moa

j apresentava histrico de doena mental e de diversas tentativas de suicdio. No local

foram coletadas larvas da mosca Cochliomyia macelaria (F.) (Diptera: Calliphoridae) que

foram utilizadas com sucesso como amostra para deteco de fenobarbital por

cromatografia gasosa e confirmao por cromatografia de camada delgada.

Num caso de um homem de 49 anos, morto h 67 dias, em estado de completa

putrefao, Kintz et al. (1990a), visando verificar a validade do emprego de insetos como

fonte alternativa para exames toxicolgicos, conseguiram detectar, por cromatografia

lquida de alta presso, nos tecidos do cadver e em larvas de califordeos coletados do

cadver a presena de cinco drogas: triazolam e oxazepam (pertencentes classe dos

benzodiazepnicos que esto entre os frmacos mais prescritos e tm ao anti-ansioltica,

anticonvulsivante, relaxante muscular e hipntico), fenobarbital (um barbitrico prescrito

para tratamento de ataques de convulso), alimemazine (um frmaco derivado das

fenotiazinas com ao anti-prurido alm de ao sedativa e anti-nuseas) e clomipramine

(uma droga classificada como psicoativa de ao antidepressiva e anti-ansioltica).

Tambm observaram que os picos endgenos nos cromatogramas obtidos da extrao dos

imaturos eram menores que aqueles dos tecidos humanos.

Kintz et al. (1990b), num outro estudo de caso no qual um homem de 65 anos,

desaparecido por seis meses foi encontrado morto e dele foram coletados insetos

sarcosaprfagos da espcie Piophila casei (Piophilidae), detectaram, por HPLC,

11

bromazepam (um diazepnico) e levomepromazina (uma fenotiazina de poder sedativo).

Neste caso no conseguiram estabelecer relao entre a concentrao da droga presente

no tecido humano e a existente nas larvas.

Em 1993, Goff et al. realizaram pesquisas experimentais com Parasarcophaga

ruficornis, um sarcofagdeo muito freqente em corpos em decomposio no Hava,

criando-os em tecidos de coelhos nos quais havia sido previamente injetados amitriptilina

e nortriptilina, frmacos com fins antidepressivos e que esto entre os mais utilizados em

casos de suicdio na regio de estudo considerada. A deteco feita por HPLC mostrou

que o frmaco pode ser recuperado de forma eficiente ao se examinar amostras de todos

os grupos tratados, confirmando que insetos so fontes alternativas confiveis para a

realizao de exames toxicolgicos.

Sadler et al. (1995) em estudos com larvas de Calliphora vicina criadas em

tecidos humanos provenientes de trs casos de suicdio por overdose de medicamentos

prescritos conseguiram detectar, por HPLC, trazodone (um componente psicoativo de

propriedades sedativa, ansioltica e antidepressiva), trimipramine e amitriptilina

(pertencentes classe dos antidepressivos tricclicos de propriedades sedativas e

ansiolticas) e temazepam (um benzodiazepnico) nas larvas em concentraes menores

das existentes nos tecidos e observou que a concentrao das drogas nas larvas diminuiu

aps oito dias, perodo associado pupariao. Os nveis de drogas medidos devem

indicar absoro nos tecidos larvais, pois uma droga ser detectada na larva, quando sua

taxa de absoro for maior do que a de excreo, e a droga atinge um nvel na larva

acima do limite de deteco do mtodo analtico. Tambm constataram que larvas de

Calliphora vicina tm uma capacidade de eliminar essas drogas, fato observado quando

foram transferidas para uma dieta livre de drogas e aps um curto perodo de tempo as

drogas j tinham sido eliminadas.

Outra preocupao o aumento do consumo de drogas de abuso, ou seja, aquelas

que no so utilizadas com fins teraputicos, mas sim como forma de entretenimento

como a cocana, a herona, a maconha, o ecstasy, a metanfetamina entre outros.

Nolte e colaboradores, em 1992, ao coletarem larvas mortas de Calliphora vicina

de um cadver pertencente a um usurio de cocana, de 29 anos, esqueletizado,

conseguiram detectar nestes espcimes, por RIA e confirmado por GC/MS, a presena de

12

cocana o que ajudou na determinao da causa da morte, uma vez que nem no local nem

durante a necropsia foram encontrados vestgios que pudessem indicar alguma forma de

morte violenta.

Goff et al. (1989; 1991) tambm observaram, atravs do mtodo de imuno-rdio

ensaio, presena de cocana (uma droga alcalide estimulante) e herona (um derivado

opiide com ao estimulante e analgsica), duas drogas com alta taxa de abuso nos

EUA, em experimentos nos quais administraram essas drogas em coelhos e os tecidos

destes foram servidos de substrato para desenvolvimento de larvas de Boettcherisca

peregrina.

Introna et al. (1990) coletaram 40 fgados de corpos cujo exame toxicolgico era

positivo para opiceos, ou seja, derivados do pio com ao analgsica, e criaram, nestes

tecidos, larvas de Calliphora vicina. As larvas de 3o estdio foram coletadas e analisadas

por RIA e constataram que a concentrao detectada nas larvas correspondia s

concentraes de cada fgado no qual haviam sido criadas. Pien et al. (2004) tambm

relataram relao proporcional de concentrao de nordiazepam e/ou seu metablito

oxazepam (benzodiazepnico de efeito sedativo e relaxante), detectado por LC-MS/MS,

em larvas de Calliphora vicina com a concentrao da droga presente no substrato de

alimentao, ou seja, conforme aumentou a concentrao da droga na dieta, aumentou a

concentrao nas larvas.

No entanto, Gunn et al. (2006) ao detectarem morfina (um opiide usado no

tratamento sintomtico da dor e muitas vezes usado como droga de abuso), por HPLC,

em larvas de Calliphora stygia, no constataram correlao entre as concentraes

obtidas nos tecidos e a nas larvas, porm notaram que as concentraes de morfina

obtidas nas larvas aumentavam conforme aumentava a concentrao da droga no

substrato do qual se alimentavam. Por sua vez, Tracqui et al. (2004) ao detectarem

benzodiazepnicos, barbitricos, antidepressivos, fenotiazinas, opiceos entre outras em

larvas coletadas de cadveres e nos tecidos necropsiados, observaram que as

concentraes de todas as larvas foram sempre menores que as dos tecidos, mas no

conseguiram estabelecer correlao entre as concentraes nas larvas e nos tecidos

humanos.

13

Goff et al. (1997), alm de detectarem em imaturos da mosca sarcofgide,

Parasarcophaga ruficornis (F.), por LC/MS, 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA),

popularmente conhecido como ecstasy (uma droga alucingena e estimulante que teve

seu uso e produo aumentados nas ltimas dcadas), reportaram uma concentrao

maior nos puprios do que a detectada nos tecidos dos quais as larvas se alimentaram. O

fato da deposio das toxinas na cutcula dos insetos como um mtodo de excreo

sugere outro mecanismo potencial para o acmulo de material ingerido em tecidos mortos

de insetos. No entanto, Goff e colaboradores (1992) no obtiveram um resultado positivo

quando tentaram detectar metanfetamina e seu metablito anfetamina por RIA em larvas

do sarcofagdeo Parasarcophaga ruficornis, obtendo uma reao fraca uniforme em

todos os grupos, o que pode ser resultado de uma reao inespecfica para outra

substncia que no a metanfetamina ou seu metablito. Por isso concluram que RIA no

seria um bom mtodo para deteco de metanfetamina quando for utilizada dptera como

fonte alternativa para evitar resultados falso-positivos.

Bourel et al. (2001a) conseguiram detectar morfina, pelo mtodo da

imunohistoqumica, em larvas de Calliphora vomitoria na qual cada espcime positivo

mostrou colorao especfica da hemolinfa sob o tegumento enquanto os controles e as

amostras negativas no apresentaram reao de colorao. A imunorreao mostrou-se

mais forte no limite entre a exocutcula e a endocutcula, pois houve reteno da morfina

devido natureza hidrofbica da epicutcula. Eles observaram que nas larvas de C.

vomitoria morfina da hemolinfa excretada por clulas epidermais e depositada prxima

aos poros dos canais na matriz cuticular. Dessa maneira a cutcula atua como uma forma

de depsito, quando a cutcula larval do terceiro estdio esclerotizada para formar o

puprio, a morfina depositada prximo aos poros dos canais incorporada ao puprio.

Em 2001b, Bourel et al. tambm detectaram, por RIA, morfina em puprio e

adultos de Lucilia sericata Meigen (Diptera: Calliphoridae) e em pupas ressecadas de

Dermestes frischi Kugelmann (Coleoptera: Dermestidae). As concentraes obtidas

foram maiores nos 2o e 3o estdio enquanto quase nenhuma morfina foi detectada nos

estgios de pr-pupa ou em pupariao. Ainda, a concentrao detectada nos puprios

foram maiores que nos adultos. Esses resultados confirmam que as larvas excretam a

14

droga no perodo ps-alimentao. No entanto, parece que enquanto a droga excretada

em rgos larvais, uma quantidade de morfina includa na cutcula do puprio.

Campobasso et al. (2004) usaram tecidos obtidos de 18 corpos necropsiados

relacionados com abuso de drogas. Nos tecidos e nas larvas foram detectados os agentes

narcticos mais comuns como opiceos e cocana, geralmente, associados com

antidepressivos (cloripramine, amitriptilina, nortriptilina, levomepromazine e tioridazine)

e benzodiazepnicos. Todas as drogas detectadas nos tecidos humanos foram detectadas

nos imaturos de Lucilia sericata. Opiceos foram detectados em 14 e em oito deles

tambm foi detectada cocana. Somente em um caso foi detectado fenobarbital associado

aos opiceos e cocana.

Neste trabalho, as concentraes de opiceos no tecido heptico foram maiores s

observadas nas larvas que tambm foi inferior das obtidas no sangue o que consistente

com a metabolizao e eliminao das drogas durante o desenvolvimento larval. Em

quatro casos, as larvas que ainda estavam se alimentando dos tecidos apresentaram

concentraes maiores do que as observadas no sangue, provavelmente devido ao

armazenamento de alimento no papo que se expande muito durante o perodo de

alimentao e esvazia rapidamente aps essa fase e o contedo estomacal rapidamente

digerido. Exceto pelos antidepressivos, todos os nveis de drogas detectados nas larvas

ps-alimentao foram menores que nas larvas em fase de alimentao (Campobasso et

al., 2004).

1.2.2 - Acumulao biolgica (Bioacmulo)

A acumulao biolgica a concentrao progressiva de uma substncia ao longo

de uma cadeia alimentar, de forma a apresentar nveis mais elevados nos tecidos de

organismos de nveis trficos mais altos (ACIESP, 1997). O bioacmulo de uma

substncia ocorre no organismo quando a absoro de tal substncia mais rpida do que

sua excreo/eliminao.

Dentre as aplicaes forenses podemos citar, alm de crime ambiental, deteco

de envenenamento por substncia capaz de bioacumular e tambm a determinao de

rea geogrfica de origem da vtima como no caso apresentado por Nuorteva (1977) onde

moscas adultas coletadas de um corpo em decomposio de uma mulher no identificada

15

encontrada numa rea rural de Inkoo, na Finlndia e analisadas para contedo de

mercrio foram usadas para determinar a regio geogrfica de origem da vtima. A baixa

concentrao de mercrio nas moscas adultas indicou que aquela mulher era de uma rea

relativamente livre de poluio por mercrio. Quando a vtima foi identificada, provou-se

que ela era uma estudante de Turku, na Finlndia, uma cidade relativamente livre de

poluio por mercrio comprovando os achados entomolgicos.

Nuorteva & Nuorteva (1982) tambm recuperaram mercrio de larvas de vrias

espcies de moscas varejeiras (Calliphoridae) criadas em tecidos de peixes contendo

concentraes conhecidas do metal pesado mostrou bioacmulo nas larvas em

desenvolvimento conforme se alimentavam do tecido contaminado e este acmulo

parecia estar relacionado presena do mercrio na forma metilada. O mercrio ingerido

foi retido at o estgio de pupa e detectvel nos adultos emergentes. No foram

observados efeitos adversos do bioacmulo nem no adulto nem nas larvas, exceto por

algumas vezes dificuldade em pupariao.

Como extenso a este estudo, adultos de besouros estafilindeos, Creophilus

maxillosus (Linnaeu) foram alimentados com larvas criadas em meio contendo mercrio,

e pde-se observar acmulo secundrio nestes insetos sem efeitos adversos

diferentemente do que ocorreu com besouros tenebriondeos, Tenebrio molitor (L.) que

apresentaram irregularidades no controle motor quando alimentados de larvas

contaminadas por mercrio. Alm disso, observaram que larvas criadas em peixes

coletados de uma regio da Iugoslvia tinham um coeficiente de bioacmulo menor do

que as criadas em peixes coletados na Finlndia, pois a porcentagem da forma metilada

do mercrio menor na Iugoslvia do que na Finlndia (Nuorteva & Nuorteva, 1982).

Sohal & Lamb (1977; 1979) tambm demonstraram o acmulo de vrios metais

(entre eles cobre, ferro e zinco) e clcio em tecidos de adultos de mosca domstica,

Musca domestica (L.) e nenhum efeito negativo foi associado ao bioacmulo desses

metais.

No entanto, Sadler et al. (1997) no conseguiram observar bioacmulo de

barbitricos em larvas de moscas varejeiras, Calliphora vicina, criadas em dieta artificial.

Alm disso, observaram que at compostos quimicamente semelhantes pareceram ser

processados diferentemente pelas larvas. Tambm preveniram quanto interpretao

16

quantitativa dos achados entomotoxicolgicos dado ao conhecimento limitado da maneira

como drogas e toxinas so absorvidas pelos insetos imaturos.

1.2.3 - Atratividade na colonizao

A atratividade de colonizao um fator importante a ser considerado na

Entomologia Forense principalmente nos casos envolvendo morte relacionada a

envenenamento, pois este fator pode levar a concluses errneas quando estimado o IPM

baseado no desenvolvimento larval.

Gunatilake & Goff (1989), por exemplo, detectaram o inseticida organofosforado

Malathion em larvas de moscas de duas espcies de Calliphoridae, Chrysomya

megacephala (Fabricius) e C. rufifacies (Macquart) coletadas dos restos de um cadver.

significativo que as larvas das duas espcies de Chrysomya indicavam um intervalo ps-

morte de cinco dias enquanto a vtima tinha sido vista viva pela ltima vez oito dias antes

de ser encontrado o corpo, o que pode indicar que a presena de Malathion teria atrasado

a oviposio por um perodo de dias. Alm disso, esperada uma fauna maior de moscas

varejeiras e besouros predadores nesse espao de tempo (entre cinco e oito dias) numa

rea aberta no Hava, o que sustenta a noo de que a ingesto de Malathion teve uma

influncia negativa na colonizao do cadver por insetos.

Diferentemente do observado com o malathion, Borges & Melo (1999), ao

trabalhar com carcaas de ratos injetados com ivermectina antes de serem sacrificados e

colocados em campo, observaram que no havia diferena significativa na atratividade

das carcaas entre o grupo controle e o experimental, que se apresentaram semelhantes

tanto quantitativamente quanto qualitativamente.

1.2.4 - Efeito das drogas sobre o desenvolvimento larval

Ao fornecer uma estimativa de IPM, especialmente entre as primeiras duas e

quatro semanas de decomposio, assume-se que o inseto desenvolver em taxas

previsveis, dadas certas condies ambientais, sendo necessrio considerar o efeito das

drogas no desenvolvimento destes insetos (Goff & Lord, 2001).

Estudos sobre a influncia das drogas no desenvolvimento dos insetos podem ser

feitos atravs de dietas artificiais, acrescendo concentraes conhecidas de droga ou

17

toxina ou, ainda, serem administradas oralmente ou por infuso num modelo animal vivo,

sendo os tecidos de tal vertebrado utilizados como fonte de alimento para as larvas de

insetos, permitindo que tais drogas ou toxinas sejam metabolizadas pelo vertebrado antes

da ingesto pelo inseto (Goff & Lord, 2001).

Goff et al. (1989) em seus estudos sobre o efeito da cocana no desenvolvimento

de larvas do sarcofagdeo Boettcherisca peregrina (Rodineau-Desvoidy) em fgados de

coelhos previamente tratados com doses conhecidas da droga, observaram dois padres

de desenvolvimento: as colnias controle e dose subletal (1/2xDL) tiveram

aproximadamente a mesma taxa de desenvolvimento enquanto as colnias de dose letal

(1xDL) e duas vezes a dose letal (2xDL) desenvolveram-se mais rpido, ocorrendo

pupariao primeiro nestes dois grupos.

Carvalho (2004) tambm estudou o efeito da cocana no desenvolvimento larval

de Chrysomya albiceps e C. putoria, duas espcies de interesse forense no Brasil, onde

observou que na 6 e 18 hora de observao e pesagem, as larvas controle de C. albiceps

se desenvolveram mais rpido que as expostas droga e o inverso ocorreu com as larvas

de C. putoria. s 24 horas de experimento, o desenvolvimento de C. albiceps do grupo

controle foi maior do que as expostas cocana, e nenhuma diferena significativa foi

observada para C. putoria. Na pesagem de 30 e 42 horas, verificou-se que no houve

diferena significativa no desenvolvimento de C. albiceps, mas as larvas de C. putoria

expostas droga se desenvolveram significativamente mais rpido em relao ao

controle. Tambm foi constatado que as larvas expostas ao fgado contendo cocana

iniciaram e terminaram o processo de pupariao antes que as do controle, com uma

diferena entre eles do incio ao fim deste processo de aproximadamente 13 h. As

diferenas entre o tempo de emergncia dos adultos foram significativas para ambas as

espcies expostas droga, sendo de aproximadamente 60 h em relao ao controle.

Um caso interessante relacionado ao efeito da cocana no desenvolvimento de

imaturos relatado por Lord (1990) onde o corpo de uma mulher branca, de

aproximadamente 20 anos, foi descoberto prximo a uma regio de pinheiros em

Spokane, Washington EUA. O cadver estava em fase inicial do estgio inchado e

apresentava uma grande populao de larvas localizadas no rosto e parte superior do

tronco. As larvas foram coletadas, criadas at adultos, identificadas e classificadas em

18

trs classes, de acordo com o tamanho: entre seis e nove mm de comprimento que seria

correspondente a um IPM de cerca de sete dias; menores que seis mm que poderia indicar

que moscas teriam oviposto em diferentes tempos na carcaa e uma nica larva de 17,7

mm recuperada da regio naso-farngea o que indicaria um perodo de IPM de

aproximadamente trs semanas o que no era possvel conforme outros dados existentes

sobre o caso. Foi suposto que a larva poderia ter migrado de outro cadver, porm no foi

encontrado nenhum outro corpo na regio. Uma explicao alternativa foi a de que o

crescimento da larva foi aumentado, pois estava localizado numa regio nasal que

continha alguma concentrao de cocana. Uma investigao subseqente revelou que a

vtima era usuria de cocana e tinha sido vista utilizando a droga antes de morrer.

Goff et al. (1991), trabalhando com Boettcherisca peregrina, investigaram o

efeito da herona, um opiide de uso recreativo muito freqente nos EUA, no seu

desenvolvimento larval e os resultados apontaram para um desenvolvimento mais rpido

dos grupos experimentais do que os grupos controles alm da produo de larvas maiores

em todos os grupos tratados. O tempo de pupa durou mais para todas as colnias

experimentais e pareceu ser proporcional quantidade de droga administrada. O estudo

demonstrou que um erro de at 29 h ocorre quando a estimativa de IPM baseada no

desenvolvimento larval cujo substrato contenha herona e entre 18 e 38 h se baseado na

durao do estgio de pupa.

Do mesmo modo, Karbouche et al. (2008), usando fgados de porcos tratados com

soluo contendo concentraes conhecidas de codena, verificaram que larvas de Lucilia

sericata desenvolviam mais rpido nos grupos tratados do que no controle e que

diferena significativa no peso corporal larval tambm foi verificada entre os grupos

experimentais (mais pesados) e o grupo controle. Em termos quantitativos no foi

encontrada relao entre as concentraes existentes nos fgados e as obtidas nas larvas.

Diferentemente do observado por Bourel et al. (1999) que utilizaram coelhos

infundidos com hidrocloridrato de morfina, um derivado opiide de poder analgsico, em

trs concentraes diferentes e observaram diferena no comprimento das larvas de

Lucilia sericata criadas em tecidos experimentais em relao ao controle nos tempos de

41 h e 69 h e, depois, nos tempos de 91, 116 e 140 h, no entanto, no foram observadas

diferenas entre os grupos controle e de 25 mg/kg no tempo de 69 h, nem entre as larvas

19

dos grupos 12,5 mg/kg e 50 mg/kg nos tempos 69, 116 e 140 h. O incio do estgio de pr-pupa ocorreu mais tardiamente no grupo 12,5 mg/kg. Quanto ao peso houve um

aumento at o estgio pr-pupa quando iniciou decrscimo at estabilizar na fase de pupa.

Observaram ainda que a taxa de desenvolvimento do grupo experimental de maior

concentrao foi mais devagar que a dos demais grupos.

No entanto, Grella & Thyssen (2008), em trabalho com larvas do califordeo

Chrysomya megacephala, criadas em dieta artificial acrescidas de Cloridrato de

oxycodone, um opiide analgsico semi-sinttico similar morfina, muito prescrito para

tratamento de dores moderadas a dores intensas, no observaram diferenas significativas

no desenvolvimento entre os grupos controle e os grupos experimentais, sugerindo a no

metabolizao dessas drogas pelas larvas nem seu bioacmulo. Alm disso, a no

influncia da droga se confirmou com uma alta taxa de viabilidade de adultos para todos

os grupos.

Goff et al. (1993), testaram o antidepressivo amitriptilina em P. ruficornis e no

observaram diferena significativa na taxa de desenvolvimento em relao s

concentraes administradas. A durao do perodo ps-alimentao foi maior nos

grupos tratados assim como a mortalidade larval. O perodo de estgio de pupa tambm

foi maior nos grupos tratados com concentraes maiores que uma dose letal.

Goff e colaboradores (1994) pesquisaram o efeito da fenciclidina, uma droga de

abuso comum nos EUA (denominada PCP) e tambm utilizada como tranqilizante

veterinrio, no desenvolvimento de imaturos do sarcofagdeo P. ruficornis e no

observaram diferenas significativas na taxa de desenvolvimento total dos insetos, porm

observaram uma diferena na durao do perodo ps-alimentar quando as larvas dos

grupos experimentais desenvolveram mais rapidamente que as do controle resultando

num intervalo entre trs e 17 h menor para os tratados.

Em estudos com metanfetamina (um derivado anfetamnico utilizado como agente

aneroxgeno ou tambm como droga recreativa na forma de cristais denominada ice)

realizados por Goff et al. (1992) houve aumento da taxa de desenvolvimento do

sarcofagdeo Parasarcophaga ruficornis para as colnias alimentadas com tecidos

contendo uma dose letal (1xDL) e duas vezes a dose letal (2xDL) quando comparadas aos

20

grupos com meia dose letal (1/2xDL) e controle, que desenvolveram na mesma taxa. A

mortalidade de pupas foi maior nas colnias 1/2xDL e 1xDL.

Carvalho (2004) estudou o efeito de outro derivado anfetamnico muito utilizado

como inibidor de apetite no Brasil, a anfepramona, em larvas de Chrysomya albiceps e C.

putoria onde verificou que esta droga no exerce efeitos significativos no

desenvolvimento de imaturo de C. albiceps. No entanto, a partir de 24 horas de contato

com a anfepramona, houve uma diferena significativa no desenvolvimento das larvas de

C. putoria em relao ao controle, sendo que no fim das 54 horas, o seu peso era quase o

dobro do controle. Tambm verificou que para C. putoria, as diferenas no tempo de

pupariao foram significativas, com as larvas dos grupos experimentais empupando

mais rapidamente que as controle. Foi observado que o tempo de emergncia dos adultos

das duas espcies cujas larvas estiveram em contato com a anfepramona foi menor que o

grupo controle, embora a diferena no tenha sido significativa para C. albiceps,

enquanto que para C. putoria foi altamente significativo, com uma diferena de 48 horas

entre o grupo experimental e o controle.

Goff et al. (1997), em trabalho sobre o efeito de outro derivado anfetamnico, o

MDMA (principal componente do ecstasy), sobre o desenvolvimento de imaturos de

Parasarcophaga ruficornis tambm observaram que entre as horas 24 e 114 de

desenvolvimento, os grupos controle e 2xDL desenvolveram mais rpido que os demais

grupos e que a mortalidade larval e de pupa foi maior nas colnias controle e 1/2xDL de

MDMA e menor nas colnias 2xDL. E quando considerado o tempo de desenvolvimento

total (larva-adulto) o do grupo 2xDL foi menor.

Num trabalho com ivermectina, Borges & Melo (1999) observaram que o

desenvolvimento das larvas foi retardado e um nmero menor de larvas conseguiu

completar o desenvolvimento na carcaa tratada com o frmaco.

Em trabalho usando como animais modelo o coelho, Carvalho et al. (2001),

estudou o efeito do diazepam (um benzodiazepnico muito prescrito por mdicos) no

desenvolvimento de larvas de Chrysomya albiceps e C. putoria, e constatou que larvas do

grupo controle se desenvolveram mais devagar que os grupos experimentais, alm das

larvas dos grupos experimentais pesarem mais que as do controle. Pien et al. (2004)

tambm constataram que as larvas de Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae) dos

21

grupos experimentais eram mais pesadas que o dos grupos controle quando realizaram

experimentos utilizando trs concentraes de nordiazepam (um benzodiazepnico de

efeito sedativo e relaxante e o principal metablito do diazepam) em larvas e puprios de

Calliphora vicina. Observaes dirias de larvas em estgio ps-alimentar, e a deteco

do metablito do nordiazepam, o oxazepam, aps o segundo dia de experimento, sugerem

que houve metabolizao e acmulo do frmaco estudado. Porm, no geral, todos os

grupos (experimentais e controle) desenvolveram na mesma taxa.

Musvasva et al. (2001) num trabalho com larvas de Sarcophaga tibialis (Diptera:

Sarcophagidae) criadas em substrato contendo sdio-metohexital (barbitrico e depressor

metablico) ou hidrocortisona (esteride comumente usado para tratamento de

inflamaes e estimulante metablico) em diferentes concentraes perceberam que a

presena de sdio-metohexital ou seus metablitos retardou significantemente o

desenvolvimento larval de S. tibialis, principalmente quando em pequenas doses bem

como a hidrocortisona e seus produtos de quebra, onde tambm foi observado atraso

significante no desenvolvimento larval. Nos dois casos o estgio de pupa pareceu ter uma

tendncia oposta ao do estgio larval.

OBrien & Turner (2004) verificaram que larvas de Calliphora vicina criadas em

substrato contendo paracetamol acelera suavemente o desenvolvimento larval durante os

dias dois e quatro, o que pode resultar numa diferena de, aproximadamente, 12 h na

estimativa do IPM neste intervalo. Porm, de forma geral, nenhuma diferena

significativa foi observada no desenvolvimento larval entre os grupos experimentais e o

grupo controle.

Ferrari et al. (2008) verificaram, ao trabalhar com larvas de Chrysomya albiceps

criadas em dieta artificial acrescida do hormnio testosterona, que as larvas do grupo

experimental apresentaram mdia do peso corporal cinco vezes maior do que a mdia de

peso corporal das larvas do grupo controle (6,0 mg e 1,2 mg por larva, respectivamente) e

que a diferena verificada no tamanho era bastante ntida.

Grella et al. (2007) trabalharam com dietas artificiais acrescidas de escopolamina,

uma droga muito usada como analgsico (princpio ativo do Buscopam), onde criaram

imaturos de Chrysomya putoria, e puderam observar que os grupos controle e tratamento

0,25xDL, tinham peso corporal maior do que os demais grupos experimentais e que o

22

grupo 1xDL teve seu tempo de desenvolvimento larval aumentado em relao aos demais

grupos. Alm disso, o grupo tratado com 2xDL teve 100% de mortalidade no 2o estdio

larval, ou seja, no completou seu desenvolvimento. A sobrevivncia observada mostrou-

se menor conforme o aumento de concentrao da droga na dieta.

Similarmente, Oliveira et al. (2009) trabalharam com buscopam, cujo princpio

ativo o brometo de butilescopolamina, acrescido em dieta artificial que foi usado como

fonte de alimento para imaturos de C. megacephala, onde observaram uma diferena

significativa no tempo de desenvolvimento larval na diferentes concentraes formando

um gradiente de diminuio de peso conforme aumentava a concentrao da droga na

dieta. O tamanho larval tambm foi diferente sendo que quanto maior a concentrao da

droga menor era a larva. Tambm observaram que quanto maior a concentrao da droga

maior era a mortalidade principalmente nos estgios larvais. Alm disso, a concentrao

de uma dose letal de rato no substrato utilizado como fonte de alimento para as larvas

ocasionou um atraso de 54 h no desenvolvimento larval, o que poderia alterar a

estimativa de IPM num caso envolvendo o uso dessa droga prvio morte.

Um resumo dos trabalhos relacionados entomotoxicologia pode ser observado

na Tabela 1.

23

Tabela 1. Resumo dos trabalhos sobre entomotoxicologia Classe do Agente Txico estudado Agente txico Espcie

Mtodo de deteco Efeitos observados

Autores do Trabalho

Cochliomyia macelaria (Diptera: Calliphoridae)

GC/MS e TLC

Beyer et al.,1980 Fenobarbital

Calliphoridae (Diptera) HPLC Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos Kintz et al., 1990a

Calliphoridae (Diptera) GC/MS ou LC/MS

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos e nenhuma relao entre

concentraes nas larvas com a nos tecidos

Tracqui et al., 2004

Amobarbital, Fenobarbital,

Tiopental, Barbital

Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae) HPLC No observou bioacmulo Sadler et al., 1997

Barbitricos

Sdio-metohexital

Sarcophaga tibialis (Diptera: Sarcophagidae) Retardo significativo do desenvolvimento larval

Musvasva et al., 2001

triazolam e oxazepam Calliphoridae (Diptera)

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos Kintz et al., 1990a

bromazepam Piophila casei (Piophilidae) Nenhuma relao entre concentraes nas larvas

com a nos tecidos Kintz et al., 1990b

temazepam Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae)

HPLC

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos Sadler et al., 1995

Nordiazepam Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae) LC-

MS/MS

Relao proporcional entre concentrao nas larvas e nos tecidos humanos; larvas mais

pesadas que as do controle Pien et al., 2004

Calliphoridae (Diptera) GC/MS ou LC/MS

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos e nenhuma relao entre concentraes nas larvas e nos tecidos

Tracqui et al., 2004

Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae) GC/MS

Nveis de drogas detectados nas larvas ps-alimentao menores que nas em alimentao

Campobasso et al., 2004

Chrysomya albiceps (Diptera: Calliphoridae)

Benzodiazepnicos

Diazepam Chrysomya putoria (Diptera: Calliphoridae)

GC/MS Acelerao do desenvolvimento larval; larvas mais pesadas que as do controle Carvalho et al.,

2001

24

Tabela 1. Continuao Classe do Agente Txico estudado Agente txico Espcie

Mtodo de deteco Efeitos observados

Autores do Trabalho

Alimemazine Calliphoridae (Diptera) Concentrao da droga nas larvas menor do que

a dos tecidos Kintz et al., 1990a

levomepromazina Piophila casei (Diptera: Piophilidae)

HPLC Nenhuma relao entre concentraes nas larvas e nos tecidos Kintz et al., 1990b

Calliphoridae (Diptera) GC/MS ou

LC/MS

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos e nenhuma relao entre concentraes nas larvas e nos tecidos

Tracqui et al., 2004

Fenotiazina

levomepromazine e tioridazine

Lucilia sericata (Diptera:

Calliphoridae) GC/MS Nveis de drogas detectados nas larvas ps-alimentao menores que nas em alimentao

Campobasso et al., 2004

clomipramine Calliphoridae (Diptera) Concentrao da droga nas larvas menor do que

a dos tecidos Kintz et al., 1990a

amitriptilina e nortriptilina

Parasarcophaga ruficornis (Diptera:

Sarcophagidae)

Nenhuma diferena significativa foi observada na taxa de desenvolvimento; a durao do

perodo ps-alimentao e pupa maior assim como a mortalidade larval

Goff et al., 1993

trazodone, trimipramine e amitriptilina

Calliphora vicina (Diptera:

Calliphoridae)

HPLC

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos Sadler et al., 1995

Calliphoridae (Diptera) GC/MS ou

LC/MS

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos e nenhuma relao entre concentraes nas larvas e nos tecidos

Tracqui et al., 2004

Antidepressivo

Cloripramine, amitriptilina, nortriptilina

Lucilia sericata (Diptera:

Calliphoridae) GC/MS Nveis de drogas detectados nas larvas ps-alimentao menores que nas em alimentao

Campobasso et al., 2004

25

Tabela 1. Continuao Classe do Agente Txico estudado Agente txico Espcie

Mtodo de deteco Efeitos observados

Autores do Trabalho

Paracetamol Calliphora vicina

(Diptera: Calliphoridae)

Acelerao do desenvolvimento larval durante os dias 2 4 resultando em diferena de,

aproximadamente, 12 h

OBrien & Turner, 2004

Escopolamina Chrysomya putoria

(Diptera: Calliphoridae)

Retardo do desenvolvimento de grupos com maior concentrao. Grella et al., 2007 Analgsico

Buscopam

Chrysomya megacephala

(Diptera: Calliphoridae)

Retardo do desenvolvimento de grupos com maior concentrao.

Oliveira et al., 2009

Hidrocortisona Sarcophaga tibialis

(Diptera: Sarcophagidae)

Retardo significativamente o desenvolvimento larval

Musvasva et al., 2001

Hormnio

Testosterona Chrysomya albiceps

(Diptera: Calliphoridae)

Mdia do peso corporal cinco vezes maior do

que a do grupo controle Ferrari et al., 2008

Boettcherisca peregrine RIA

Acelerao do desenvolvimento larval quando em alta concentrao Goff et al., 1989

Chrysomya albiceps (Diptera:

Calliphoridae) Estimulante Cocana

Chrysomya putoria (Diptera:

Calliphoridae)

Acelerao do perodo de pupariao resultando em diferena de, aproximadamente, 13 h Carvalho, 2004

26

Classe do Agente Txico estudado Agente txico Espcie

Mtodo de deteco Efeitos observados

Autores do Trabalho

Herona Boettcherisca peregrina RIA Acelerao do desenvolvimento e larvas

maiores que a do grupo controle Goff et al., 1991

Calliphora vicina (Diptera:

Calliphoridae) RIA Concentrao nas larvas correspondente concentrao nos tecidos

Introna et al., 1990

Calliphoridae (Diptera)

GC/MS ou LC/MS

Concentrao da droga nas larvas menor do que a dos tecidos e nenhuma relao entre concentraes nas larvas e nos tecidos

Tracqui et al., 2004

Lucilia sericata (Diptera:

Calliphoridae) GC/MS Concentraes no tecido maiores que a das larvas

Campobasso et al., 2004

Calliphora stygia (Diptera:

Calliphoridae) HPLC Relao de proporcionalidade entre a concentrao das larvas com a dos tecidos Gunn et al., 2006

Calliphora vomitoria (Diptera:

Calliphoridae) IHQ Deposio da droga na cutcula Bourel et al., 2001a

Bourel et al., 1999 Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae)

Deposio da droga na cutcula, retardo na taxa de desenvolvimento larval do grupo experimental de maior concentrao

Morfina

Dermestes frischi (Coleoptera: Dermestidae)

RIA

Deposio da droga na cutcula Bourel et al.,

2001b

Codena Lucilia sericata

(Diptera: Calliphoridae)

Acelerao do desenvolvimento e larvas maiores que a do grupo controle Karbouche et al.,

2008

Opiide

Cloridrato de oxycodone

Chrysomya megacephala

(Diptera: Calliphoridae)

Nenhuma diferena significativa foi observada quanto taxa de desenvolvimento larval Grella & Thyssen,

2008

27

Tabela 1. Continuao Classe do Agente Txico estudado Agente txico Espcie

Mtodo de deteco Efeitos observados

Autores do Trabalho

MDMA (ecstasy) LC/MS

Concentrao maior detectada em puprios; Acelerao do desenvolvimento no grupo com

maior concentrao Goff et al., 1997

Metanfetamina (ice) RIA

Acelerao do desenvolvimento larval; RIA ineficiente para deteco desta droga em larvas Goff et al., 1992

Alucingenos

Fenciclidina (PCP)

Parasarcophaga ruficornis (Diptera:

Sarcophagidae)

GC/MS Acelerao de 3-17 h na fase ps-alimentar Goff et al., 1994

Chrysomya albiceps (Diptera: Calliphoridae) No houve diferena significativa Derivado

anfetamnico

Anfepramona Chrysomya putoria (Diptera: Calliphoridae)

GC/MS Acelerao do desenvolvimento, de aproximadamente, 48 h

Carvalho, 2004

Chrysomya megacephala (Diptera:

Calliphoridae) Inseticidas Malathion

Chrysomya rufifacies

(Diptera: Calliphoridae)

GC Influncia negativa na colonizao do cadver por insetos Gunatilake e Goff,

1989

Vermfugo Ivermectina Artrpodes sarcosaprfagos Sem efeito na colonizao do cadver por

insetos; Retardo do desenvolvimento das larvas e menos larvas completaram o desenvolvimento

Borges & Melo, 1999

Calliphoridae (Diptera) Bioacmulo nas larvas relacionado presena

do mercrio na forma metilada; sem efeitos adversos

Creophilus maxillosus (Coleoptera:

Staphilinidae) Bioacmulo secundrio e sem efeitos adversos

Mercrio

Tenebrio molitor (Coleoptera:

Tenebrionidae)

Bioacmulo secundrio; apresentaram irregularidades no controle motor

Nuorteva & Nuorteva, 1982 Metais pesados

cobre, ferro e zinco

Musca domestica (Diptera: Muscidae) Bioacmulo e sem efeitos adversos

Sohal & Lamb, 1977; 1979

28

1.3 - Derivados Anfetamnicos

O termo anfetamnicos refere-se s substncias compostas pela anfetamina e

seus derivados que, quimicamente, apresentam o esqueleto bsico da -fenetilamina e

atuam como aminas simpatomimticas. As drogas derivadas da anfetamina foram

criadas por laboratrios a partir de diversas substituies na estrutura bsica da

anfetamina conforme mostra a Figura 1 (Chasin & Salvadori, 1996; Passagli &

Carvalho, 2007).

A primeira anfetamina foi sintetizada em 1887, sendo usada com fins

teraputicos a partir da dcada de 1920 quando foram descobertas suas propriedades

estimulantes centrais e supressoras de apetite sendo assim utilizadas para o tratamento

de obesidade, narcolepsia, hipotenso e sndrome da hiperatividade. J na Segunda

Guerra Mundial foram usadas pelos militares com o intuito de retardar o aparecimento

de fadiga nos soldados. Atualmente, estudantes e motoristas de caminho utilizam, o

popularmente denominado como rebite, como recurso para se manter acordados e

alertas por maiores perodos de tempo e como forma de aumentar a capacidade de

concentrao e raciocnio (Chasin & Salvadori, 1996; Passagli & Carvalho, 2007).

Dentre os estimulantes, o abuso de anfetamnicos constitui um srio problema

na escala mundial uma vez que por pertencerem a uma classe de compostos no

catecolamnicos que produz uma acentuada ao estimulante no sistema nervoso central

(SNC), mais persistente do que a cocana, os tornam mais atrativos como frmacos de

abuso. Por aumentar o estado de alerta fsico e mental, os anfetamnicos so muito

populares entre os indivduos que necessitam de prolongada viglia (Chasin &

Salvadori, 1996).

No Brasil, a anfetamina e seus derivados, utilizados como anorexgenos ou nos

distrbios de hiperatividade em crianas, tm sua comercializao sujeita s exigncias

das portarias 27 e 28 de 1986 da Diviso Nacional de Vigilncia Sanitria de

Medicamentos (DIMED), enquanto os utilizados em formulaes como

descongestionantes nasais como a nazafolina, efedrina e fenilefrina so de venda livre.

Os anfetamnicos com propriedades alucingenas so de uso proscrito em nosso pas

(Chasin & Salvadori, 1996). Segundo relatrios do International Narcotic Control

Board (INCB), o Brasil est entre os quatro pases com maior consumo de inibidores de

29

apetite do mundo. Parte desse uso pode ser explicada pelo grande apelo social

utilizao desses frmacos para o controle da obesidade.

Silva & Yonamine (2004) fizeram um levantamento no Brasil onde constataram

que usurios de anfetamina foram encontrados nas regies nordeste, centro-oeste e

sudeste e que 50% das amostras de urina coletadas eram de companhias de transportes

rodovirios o que poderia explicar os resultados positivos encontrados neste estudo

devido ao uso do femproporex para manter o estado de alerta por mais tempo.

Devido s propriedades estimulantes da atividade motora, os anfetamnicos

eram muito utilizados em competies esportivas, como agentes de dopagem, visando

melhorar o desempenho em questes de minutos e, por isso, muito utilizados nas

dcadas de 60 e 70. Atualmente, devido s metodologias mais sensveis para deteco

dessas substancias no controle da dopagem houve uma substancial diminuio no abuso

desses agentes nos esportes (Chasin & Salvadori, 1996).

Figura 1. Estruturas de compostos anlogos anfetamina: METH = metanfetamina, AMPH = d-anfetamina e MDMA = ecstasy (Barr et al., 2006).

30

Os anfetamnicos disponveis no mercado ilcito, freqentemente, so

comercializados em pequenas cpsulas de gelatinas ou comprimidos. Em alguns pases

esses derivados encontram-se como bases livres em veculo oleoso. Praticamente todas

as misturas ilcitas contm os anfetamnicos na forma de cloridrato, sulfato ou fosfato e

se encontram como ps, comprimidos ou cpsulas (Chasin & Salvadori, 1996).

Segundo o Relatrio Mundial sobre Drogas de 2008 (World Drug Report WDR), a

apreenso de derivados anfetamnicos em 2006 voltou a crescer sendo similar ao pico

de apreenses realizadas em 2000, sendo que a apreenso de metanfetamina

correspondeu a 33,1% do total e ecstasy a 9,4%.

1.3.1 - Toxicocintica

A anfetamina rapidamente absorvida pelo trato gastrointestinal. Aps

administrao de 10 a 15 mg, o pico de concentrao plasmtica ocorre entre uma e 2

horas, e a absoro geralmente se completa entre quatro e 6 horas. Os anfetamnicos

so amplamente distribudos e as altas concentraes cerebrais parecem estar

relacionadas a transportes especiais de penetrao na barreira hematenceflica, que

ocorrem concomitantemente difuso passiva, o que explica a rpida velocidade de

penetrao da anfetamina no crebro (Chasin & Salvadori, 1996).

Os compostos anfetamnicos so biotransformados, primordialmente no fgado,

tendo como vias principais a hidroxilao aromtica, a -hidroxilao na cadeia lateral,

desaminao oxidativa e N-desalquilao (Chasin & Salvadori, 1996). Os derivados

inativos so excretados pela urina, pequena parte convertida em norefedrina e outra

parte (cerca de 30%) excretada pelos rins sem alteraes em 24 horas (Chasin &

Salvadori, 1996; Passagli & Carvalho, 2007).

1.3.2 - Toxicodinmica

Muitos autores creditam as aes dos anfetamnicos similaridade estrutural

com a dopamina e norepinefrina podendo, assim, funcionar como falsos

neurotransmissores. O mecanismo de ao mais provvel a liberao direta dos

neurotransmissores das vesculas sinpticas, bem como a inibio da recaptao dos

mesmos, com conseqente aumento na concentrao sinptica, alm de serem

31

inibidores da MAO, enzima responsvel pela oxidao da norepinefrina e serotonina

(Chasin & Salvadori, 1996).

1.3.3 - Dependncia e Tolerncia

Os anfetamnicos, em particular a anfetamina e a metanfetamina, apresentam

um alto potencial de abuso e conseqentemente propiciam o desenvolvimento de

farmacodependncia (Chasin & Salvadori, 1996).

Assim como ocorre com a cocana, os mecanismos envolvidos nas propriedades

de reforo dos anfetamnicos parecem se relacionar com o aumento extracelular de

dopamina no ncleo acumens (rea lmbica) e ncleo caudado (rea subcortical motora)

(Chasin & Salvadori, 1996).

Embora esteja comprovada a dependncia dos anfetamnicos, h controvrsias

quanto ao desenvolvimento ou no da neuroadaptao. A sndrome que ocorre aps a

retirada do frmaco, aps uso crnico, caracterizada por fadiga, hiperfagia, apatia,

letargia, ansiedade, distrbios do sono e depresso, que pode ser profunda e de longa

durao (Chasin & Salvadori, 1996).

A tolerncia aos efeitos subjetivos e anorexgenos dos anfetamnicos rpida e

h taquifilaxia. Doses normalmente utilizadas, seja nas prescries mdicas ou na auto-

administrao, esto entre 20-40 mg, via oral, diariamente e freqentemente

aumentada a valores situados entre 50-150 mg por essa via (Chasin & Salvadori, 1996).

Com a inteno de obter ou prolongar as sensaes prazerosas, obtidas aps a

injeo de frmacos de abuso, usurios crnicos utilizam doses repetidas de anfetamina

ou metanfetamina que atingem 1 g por episodio ou 5-15 g por dia, sendo que a DL50 da

anfetamina de 20-25 mg/kg e estudos com animais sugerem que doses de 5 mg/kg

podem causar a morte, sendo que a menor dose letal relatada de 1,5 mg/kg (Chasin &

Salvadori, 1996).

1.3.4 - Metanfetamina

A metanfetamina um frmaco mais potente que a d-anfetamina e facilmente

sintetizada em laboratrios clandestinos atravs de reagentes qumicos facilmente

obtidos. Como droga de abuso, a metanfetamina tambm conhecida pelos nomes de

32

speed, cristal, crank, meth, go e ice (Figura 2). O cloridrato de metanfetamina usado

por via oral, por injeo intravenosa e por via intranasal (Yonamine, 2004). A

metanfetamina, utilizada com fins recreacionais e com alto potencial de abuso,

motivo de preocupao devido ao seu consumo via respiratria na sua forma bsica,

denominada popularmente como ice, apresentar maior ao e ter os efeitos mais

prolongados (Chasin & Salvadori, 1996; Passagli & Carvalho, 2007).

Figura 2. Diversas formas de metanfetamina: em comprimidos (rebite) para serem ingeridos oralmente, em cristais (crystal, ice) e em pasta para serem usados por via

respiratria.

Muitos indivduos abusam simultaneamente do emprego de barbitricos,

ansiolticos e lcool, alm dos prprios estimulantes, tanto para combater a insnia

como a agitao que experimentam. Os barbitricos, de modo particular, so utilizados

em combinao com os anfetamnicos para aumentar os efeitos subjetivos dos

estimulantes (Chasin & Salvadori, 1996).

Segundo dados do Drug Enforcemente Administration (DEA), na dcada de

1960, nos EUA, os produtos farmacuticos de metanfetamina estavam disponveis e

eram altamente abusados. Com a mudana na dcada de 1970 para o quadro de

substncias controladas houve uma reduo no abuso dessa droga. Porm nos anos

1980 o abuso da metanfetamina ressurgiu e hoje considerada uma droga de alto

potencial de abuso, ficando atrs somente de lcool e maconha nos estados do oeste e

meio-oeste.

De acordo com o Levantamento Nacional sobre Droga e Sade (National Survey

on Drug Use and Health) de 2004, aproximadamente 11,7 milhes de americanos

maiores de 12 anos j tinham experimentado metanfetamina pelo menos uma vez na

vida, o que representa 4,9% da populao dessa faixa etria. Aproximadamente 1,4

33

milhes (0,6%) reportaram usar metanfetamina no ltimo ano prvio pesquisa e

583.000 (0,2%) reportaram uso no ltimo ms prvio pesquisa. A UNODC (Unit

Nation Office on Drugs and Crime) acredita que no mundo existam entre 15 e 16

milhes de usurios de metanfetamina e o Brasil est enquadrado como o pas com a

maior taxa de abuso na Amrica do Sul segundo o WDR 2008 (Figura 3), que tambm

reportou que na Amrica do Sul houve um aumento no nmero de usurios de

anfetamnicos que entram nos pases, em sua maior parte, de forma legal como

substncia prescrita.

Em 2006, segundo o WDR 2008, a quantidade de metanfetamina apreendida no

mundo diminuiu em relao a 2000, porm um nmero maior de pases reportou tal

apreenso (de 15 pases em 2000 para 30 em 2006), indicando uma expanso em

termos geogrficos.

Figura 3. Padro de usurios de anfetaminas no mundo (WDR, 2008).

1.3.5 - Ecstasy

O MDMA foi sintetizado e patenteado pelo laboratrio Merck, na Alemanha,

em 1912, sem uma definio de sua finalidade teraputica (Almeida & Silva, 2003).

34

Nos ltimos 20 anos, anfetaminas modificadas tm sido sintetizadas em laboratrios

clandestinos para serem utilizadas com fins no-mdicos, com o objetivo de intensificar

as experincias sociais. Dentre elas, a mais conhecida no Brasil o 3,4-

metilenodioximetanfetamina (MDMA, ecstasy), que uma anfetamina modificada com

potentes efeitos estimulantes do sistema nervoso central e tem seu uso associado aos

clubbers e suas festas denominadas raves (Ribeiro & Marques, 2002; Moro et al, 2006;

Quinton & Yamamoto, 2006), sendo, por esse motivo, conhecida como Club drug

(Almeida & Silva, 2003; Moro et al, 2006).

O ecstasy habitualmente comercializado e consumido em comprimidos, de

diversas cores e tamanhos, contendo cerca de 120 mg de MDMA e seus efeitos duram

entre quatro e 8 horas (Ribeiro & Marques, 2002; Almeida & Silva, 2003) (Figura 4).

Figura 4. Comprimidos de Ecstasy de diversas formas, cores e smbolos.

De forma aguda, o MDMA tem diversos efeitos, perifrico e central, levando

ativao psicomotora, euforia, diminuio do apetite e hipertermia (Ribeiro & Marques,

2002; Quinton & Yamamoto, 2006). Devido s suas fortes propriedades eufricas, o

MDMA tem uma taxa de abuso alta e o uso crnico pode levar a comportamentos

psicticos e violentos (Quinton & Yamamoto, 2006).

O abuso dessas drogas um problema crescente nos EUA onde, de acordo com

a Pesquisa Nacional sobre Uso de droga e Sade de 2003 (NSDUH), 2,1 milhes de

americanos maiores de 12 anos j experimentaram ecstasy. Alm disso, a

Administrao e Servios sobre Substncia de abuso e Doena mental (SAMSHA)

35

reportou um aumento de 54%, entre 1995 e 2002, nos atendimentos relacionados ao uso

de anfetaminas dos prontos socorros (Quinton & Yamamoto, 2006).

No Brasil, segundo um levantamento nacional sobre o uso de agentes

psicoativos, aproximadamente 0,6% dos entrevistados, maiores de 12 anos, relataram

ter consumido ecstasy ou outros agentes alucingenos pelo menos uma vez durante a

vida (Moro et al., 2006). Evidncias como uma maior visibilidade na imprensa

brasileira, aumento no nmero de apreenses de comprimidos e a descoberta do

primeiro laboratrio clandestino de produo em So Paulo podem ser indicativo de

que o nmero de usurios de ecstasy aumenta a cada ano (Almeida & Silva, 2003). O

padro de usurios de ecstasy no mundo pode ser observado na Figura 5.

Figura 5. Padro de usurios de ecstasy no mundo (WDR, 2008)

Embora MDMA seja considerada uma droga segura, ou seja, que no representa

um perigo fsico, existe relatos de reaes adversas e mortes relacionadas ao seu

consumo (Almeida & Silva, 2003). Muitas variveis, incluindo dose, via de

36

administrao e regime, determinam a extenso pela qual o efeito txico e

neuromodulatrio sero observados. Alm disso, diferenas na sensibilidade tm sido

observadas entre diferentes linhagens de uma espcie e entre gneros, indicando que

indivduos mais susceptveis mostraro sinais de toxicidade com doses menores que

indivduos menos suscetveis (Aerts, 1997).

Tambm se deve levar em considerao que existe uma alta freqncia de uso

do ecstasy em associao com outras drogas psicoativas o que aumenta o risco de

reaes txicas (Almeida & Silva, 2003). Na Finlndia, Vuori et al. (2002) reportaram

quatro casos de morte relacionada ao uso de MDMA associado moclobemide, um

inibidor da MAO.

Estudos pr-clnicos revelaram que o MDMA produz um dano, a longo prazo,

nos terminais dopaminrgicos e serotoninrgicos em mltiplas reas do crebro

(Quinton & Yamamoto, 2006), pois estimulam a liberao de neurotransmissores

monoamnicos como serotonina, noradrenalina e em menor extenso dopamina (Inman

& Greene, 2003).

Reaes severas, por vezes com resultados fatais, tm ocorrido aps a ingesto

de doses normais, o que parece indicar que em humanos este efeito no seja dose-

relacionado. As principais complicaes que podem ser fatais na overdose por

anfetaminas so a hipertermia (que pode ser fulminante), a hipertenso, ataques

convulsivos, colapso cardiovascular, traumas e falncia renal aguda (Aerts, 1997;

Ribeiro & Marques, 2002).

Alguns autores atribuem a hipertermia (temperatura corporal de at 42o C)

liberao de grande quantidade de serotonina a partir de terminais serotoninrgicos

induzida pelo MDMA (Moro et al., 2006). Essa resposta hipertrmica tem mostrado ter

um papel importante no desenvolvimento de toxicidade dos terminais 5-HT e DA a um

longo prazo (Quinton & Yamamoto, 2006), uma vez que depois de repetidas injees

com alta dose de MDMA pode refletir em perda de terminais nervosos de serotonina

(Aerts, 1997). Por isso, o controle da temperatura corprea o meio mais importante

na preveno de reaes severas ao MDMA, o que indicado ser feito com isotnico

ao invs de gua pura (Aerts, 1997).

37

Os casos de convulso geralmente tm sua causa atribuda hiponatremia e ao

edema enceflico por provvel intoxicao hdrica resultante da ingesto abusiva de

gua em indivduos com sudorese intensa provocada pela elevao da temperatura

corporal induzida pelo MDMA e agravada pela intensa atividade fsica durante as festas

(Moro et al., 2006).

Arritmia cardaca , geralmente, notada em pronto-socorros e , provavelmente,

outra maneira de levar morte, especialmente naqueles que tem predisposio para ter

anormalidades cardacas. O aumento da presso cardaca e aumento da taxa cardaca

causada pelo MDMA podem ser deletrios em pessoas com problemas cardacos

(Aerts, 1997).

MDMA pode causar danos no fgado, result