1Graduandos pelo Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG;2Farmacutica mestre; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG 3Farmacutica mestre; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG;4Farmacutica doutora pela Universidade Federal de Minas gerais; Docente do Curso de Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais UnilesteMG

INVESTIGAO DE MUTAO NOS GENES DO FATOR V, DA

PROTROMBINA E DA METILENOTETRAHIDROFOLATO REDUTASE (MTHFR)

EM PACIENTES COM HISTRIA DE TROMBOSE

INVESTIGATION OF MUTATION IN GENE FACTOR V, PROTHROMBIN AND METHYLENETETRAHYDROFOLATE REDUCTASE (MTHFR) IN PATIENTS

WITH HISTORY OF THROMBOSIS

Bonfim, Ariane da Silva1; Favoreto, Nbia Mara de Sousa1; Silva, Rvia Mara

Morais2; Brum, Carla de Aredes3; Valado, Analina Furtado4

RESUMO A trombose reconhecidamente uma doena de carter multifatorial e sua ocorrncia est intimamente relacionada com a presena de fatores genticos e/ou adquiridos. Os fatores genticos envolvidos no estudo consistem em mutaes em diferentes genes, podendo ocorrer isolados ou combinados entre si. O presente estudo investigou mutaes no gene do Fator V de Leiden, Fator II (Protrombina) e Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR), em seis indivduos que apresentaram evento trombtico sem causa diagnosticada. Os participantes do estudo eram do sexo feminino, faziam uso de anticoncepcional oral ou reposio hormonal. Para a deteco da mutao no Fator V de Leiden e MTHFR foi utilizada a tcnica de PCR RFLP, j para o Protrombina PCR ASO. Neste estudo houve uma prevalncia de mutao no gene do Fator V de Leiden, sendo que dos seis casos analisados, quatro apresentaram mutao em heterozigose para o mesmo. Dois apresentaram mutao em heterozigose para MTHFR. Para Protrombina no foi identificada mutao. Vale ressaltar que a populao analisada neste estudo foi relativamente pequena. Este estudo demonstrou a influncia de mutaes, mas como destacado na literatura foi visto que, alm dos fatores genticos, a soma dos fatores adquiridos potencializa ainda mais o risco para ocorrncia do evento, bem como o fato de que a ausncia das principais mutaes descritas na literatura no exclui a possibilidade de ocorrncia de trombose. Palavras Chave: Trombofilia, Fatores de risco, Reao em Cadeia Polimerase (PCR). ABSTRACT

Thrombosis is recognized as a multifactorial disease and its occurrence is closely related to the presence of genetic factors and / or acquired. Genetic factors involved in the study consist of mutations in different genes, may occur alone or in combination with each other. The present study investigated mutations in Factor V Leiden, Factor II (Prothrombin) and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) in six subjects who had diagnosed thrombotic event without a cause. The study participants were female, were using oral contraceptives or hormone replacement.

________________________________________________________________________________

Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.

To detect the mutation in Factor V Leiden and MTHFR was used the PCR - RFLP, PCR has to Prothrombin - ASO. In this study there was a prevalence of mutation in the gene for Factor V Leiden, and the six cases examined, four had heterozygous mutation for the same. Two were heterozygous for MTHFR mutation. For Prothrombin mutation was not identified. It is noteworthy that the population analyzed in this study was relatively small. This study demonstrated the influence of mutations, but as noted in the literature was seen that in addition to genetic factors, the sum of acquired factors further enhances the risk for the event, and the fact that the absence of major mutations described in literature does not exclude the possibility of thrombosis. Keywords: Thrombophilia, Risk factors, Polymerase Chain Reaction (PCR).

INTRODUO

A trombose reconhecidamente uma doena de carter multifatorial,

atingindo em mdia 1/1000 indivduos adultos por ano. Essa incidncia varia de

acordo com a idade, sendo dez vezes menor em indivduos com idade entre 20 a 40

anos em comparao a faixas etrias mais avanadas (KONOPKA et al., 2010).

Trata-se de um processo patolgico relacionado ativao inadequada dos

mecanismos hemostticos nos vasos no lesados. Sua ocorrncia est intimamente

relacionada presena de fatores genticos e adquiridos (utilizao de

anticoncepcional oral, gravidez, imobilizao aps cirurgias, traumatismo ou

doenas malignas) que concorrem isoladamente ou em associao para o seu

desencadeamento (GUIMARES et al., 2009).

Na maioria das doenas tromboemblicas, a principal anormalidade no est

na coagulabilidade, mas sim no stio onde ela ativada. Tanto para executar a

hemostasia quanto para formar o trombo, o mecanismo de coagulao segue os

mesmos passos, cujo conhecimento permite reconhecer anormalidades geradoras

de tromboses (FUCHS et al., 2004).

Os fatores de risco para trombose incluem a hipertenso arterial, o tabagismo,

dislipidemias e o diabetes mellitus. Entre os fatores adquiridos clssicos que

contribuem para a trombose podemos citar a idade, o uso de certos medicamentos

como os anticoncepcionais orais e a terapia de reposio hormonal, gravidez e

puerprio, imobilizao de membros ou de parte do corpo, traumas locais, cncer,

presena de anticorpos antifosfolpides, cirurgias de grande porte, infeces e

sndrome nefrtica (GUIMARES et al., 2009).

________________________________________________________________________________

Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.

Trombofilias hereditrias so condies genticas que aumentam o risco de

doena tromboemblica e podem ser causadas por inibio insuficiente da cascata

de coagulao, por mutaes com perda funcional ou por atividade coagulante

aumentada atravs de mutaes com ganho de funo (ALMEIDA, 2010).

Os fatores genticos envolvidos no estudo consistem em mutaes em

diferentes genes que codificam fatores hemostticos, podendo ocorrer isolados ou

combinados entre si. As principais desordens genticas incluem: resistncia ao

da protena C ativada (Fator V de Leiden), mutao do gene do Fator II

(Protrombina), mutao na enzima MTHFR entre outras (ORRA, 2002).

O Fator V de Leiden o mais importante fator de risco gentico da trombose.

Trata-se de uma alterao hereditria, autossmica dominante, que interfere na

atuao da protena C, na sua forma ativada, que um dos fatores reguladores do

sistema de coagulao e que atua na inativao proteoltica do fator V e do fator VIII.

Esta alterao decorrente de uma transio G->A na posio 1691 do gene,

resultando na substituio de Arginina (R) por Glutamina (Q) na posio 506 na

protena (que constitui stio de clivagem da PC ativada na molcula do fator V),

induzindo resistncia da protena C ativada, na qual a clivagem e inativao do

fator V so feitas de forma insatisfatria, levando-o ao acmulo e conseqentemente

aumentando o risco de trombose (GODOY, 2005).

O Fator II (Protrombina), sintetizada no fgado na presena de vitamina K, a

precursora da trombina, que ao final da cascata de coagulao induz a formao da

fibrina. A trombina participa da cascata de coagulao e ao se ligar

trombomodulina ativa o sistema da protena C, tendo papel crucial no equilbrio pr

coagulante ou anticoagulante (BARROS et al., s.d). O gene do fator II esta

localizado no cromossomo 11 prximo ao centrmero, contem aproximadamente

21.000 pares de bases (pb) e composto de 14 exons e 13 introns. Em 1996 foi

descrita a variante allica protrombina G20210A, uma mutao na regio 3 no

traduzida do gene da protrombina, que consiste na substituio de guanina por

adenina no nucleotdeo 20210 localizada prximo ao sitio de clivagem do precursor

do RNA mensageiro (RNAm) em que a cauda poli-A e adicionada. Essa mutao se

associa a aumento da estabilidade do seu RNAm e concentrao plasmtica da

protrombina, o que parece ser o mecanismo pelo qual predispe a ocorrncia de

trombose (RAMOS et al., 2008)

________________________________________________________________________________

Farmcia & Cincia, v.2, p.23-38, ago./nov. 2011.

A Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR) uma enzima envolvida na

remetilao de homocistena em metionina. Nesta enzima ocorre a substituio de

uma Alanina por Valina (transio C->T no nucleotdeo 677). Uma deficincia na

enzima MTHFR acarreta aumento da concentrao plasmtica de homocistena,

conhecida como hiper-homocisteinemia, que alm de favorecer a instalao de

placas de ateroma nas artrias elsticas e musculares, tambm pode acometer

vasos de todos os calibres com tromboses tanto arteriais quanto venosas (BONINI-

DOMINGOS et al., 2005).

A deteco de mutao em pacientes portadores de eventos trombticos

recomendada para esclarecimento das causas e para efetuar o rastreamento em

membros de sua famlia, ainda sem o aparecimento de eventos trombticos, de

forma a avaliar os riscos associados e assim determinar um acompanhamento

mdico preventivo.

Dada a importncia de polimorfismos genticos, este estudo teve como

objetivo investigar a presena da mutao G1691A no gene do Fator V (Fator V

Leiden), G20210A no gene do Fator II (Protrombina) e C677T no gene

Metilenotetrahidrofolato Redutase (MTHFR) em pacientes com histria de trombose

pregressa.

METODOLOGIA 1. Seleo dos pacientes e Coleta do material biolgico

A capacit